烟草烟雾提取物通过TGF-β1/Smad2通路诱导RLE-6TN细胞凋亡

发布时间：2025-02-08 16:00

　　 目的研究烟草烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对体外培养的大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响,探究其潜在机制。方法体外培养大鼠肺泡上皮RLE-6TN细胞株24 h,分别加入0.5%、1.0%、2.0%CSE共培养48 h;转化生长因子-β1(TGF-β1)受体抑制剂(SB431542)500 nmol/L作用RLE-6TN细胞株24 h后,加入2.0%CSE共培养48 h。Hoechst染色后观察细胞核的形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测TGF-β1、p-Smad2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3裂解片段(Cleaved Caspase-3)的表达。结果经不同浓度(0.5%、1.0%、2.0%)的CSE作用48 h后,Hoechst染色可见部分凋亡细胞,核发白、固缩、染色质边集等现象;细胞早期凋亡率由(5.270±0.526)%增加至(32.580±0.413)%(P<0.01);TGF-β1、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白表达量增加;TGF-β1受体抑制剂(SB431542)干预后,Smad2和C...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 药物、试剂和仪器
    1.2 细胞株来源及培养
    1.3 烟草烟雾提取物的制备
    1.4 Hoechst染色
    1.5 Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡
    1.6 Western blot检测TGF-β1、Smad2、p-Smad2和Cleaved Caspase-3蛋白的表达
    1.7 TGF-β1受体抑制剂SB431542阻滞TGF-β1/Smad2信号通路
    1.8 统计学分析
2 结果
    2.1 CSE对RLE-6TN细胞核形态的影响
    2.2 CSE对可诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮RLE-6TN细胞凋亡的影响
    2.3 CSE对RLE-6TN细胞TGF-β1/Smad2信号通路及Cleaved Caspase-3蛋白的影响
    2.4 阻滞TGF-β1/Smad2信号通路对CSE诱导的RLE-6TN细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达的影响
3讨论



本文编号：4031612