人粪中两种钩虫卵的PCR分类鉴定方法初探

发布时间：2017-05-28 21:07

  本文关键词：人粪中两种钩虫卵的PCR分类鉴定方法初探，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：试从人类粪便标本中提取钩虫卵DNA利用PCR技术扩增COI基因，对寄生人体的两种主要钩虫，十二指肠钩口线虫和美洲板口线虫进行分类鉴定，为达到快速从人类粪便中对钩虫进行分类鉴定与诊断的目的奠定初步的实验基础。 方法：实验分为现场采样和实验室检测两部分，现场工作主要是收集西双版纳州景洪市和勐海县多所小学四年级学生的粪便样本，采用改良加藤法对每份粪便样本进行“一粪三检”，经镜检确定寄生虫虫卵类型并且对各种虫卵分别进行计数，筛选出钩虫卵含量较高的样本，将样本置于95%的乙醇中于4冰箱保存准备下一步检测；实验室中将收集的标本采用PCR方法进行分类鉴定并测序，测序结果经BLAST比对确定基因类型。 结果：选取钩虫卵含量较高的40份粪便样本作为阳性样本，其中单纯只含有钩虫卵的样本为26份，除钩虫卵外还含有蛔虫卵的样本为3份，除钩虫卵外还含有鞭虫卵的样本为5份，同时含有钩虫卵、蛔虫卵、鞭虫卵的样本为6份。选取10份不含钩虫卵或不含任何虫卵的粪便样本作为阴性对照样本。经PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳检测结果，14份镜检阳性样本出现阳性条带，位置在300bp-500bp之间，测序后进行BLAST比对，有6份样本与美洲钩虫COI基因的相似率均在84%-99%，即敏感性35%（14/40），假阳性57%（8/14）；而作为对照的10份阴性样本PCR扩增后，琼脂糖凝胶电泳均未见条带，特异性100%。 结论：实验证明了利用PCR技术扩增从粪便中提取的钩虫卵DNA，并且以此鉴定出感染钩虫类型的方法是可行的，但由于初步实验的检出率较低，可能受多个步骤和多种因素影响，需要后续研究不断改进实验方法，提高实验的敏感性、特异性等。
【关键词】：十二指肠钩口线虫 美洲板口线虫 分类鉴定 PCR
【学位授予单位】：大理学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R383.13
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-20
• 材料与方法20-27
• 结果27-34
• 讨论与分析34-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 附录40-41
• 文献综述41-49
• 参考文献46-49
• 致谢49

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：403455