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B群脑膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保护作用的初步研究

发布时间:2017-05-31 21:05

  本文关键词:B群脑膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保护作用的初步研究,由笔耕文化传播整理发布。


【摘要】:目的:扩增B群脑膜炎奈瑟菌表面蛋白A(NspA)基因,构建pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体,通过肌注和滴鼻法免疫雌性BALB/c小鼠,观察小鼠体内产生体液免疫和细胞免疫应答水平,计算疫苗的免疫保护率,为研究B群脑膜炎奈瑟菌核酸疫苗提供相关的实验依据。 方法:制备去内毒素的pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体,通过Lip2000转染试剂在RAW264.7和COS-7细胞中进行转染,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测nspa基因mRNA的转录水平,通过免疫组化法检测NspA基因在真核细胞中的表达水平。通过肌注和滴鼻的方式免疫3-4周龄的雌性BALB/c小鼠,采用间接ELISA法检测小鼠血清中产生的特异性IgG和生殖道黏膜灌洗液中sIgA抗体水平, ELISA双抗体夹心法检测免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4的水平,CCK8法检测脾淋巴细胞增殖反应。构建脑膜炎球菌动物感染模型,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护率。 结果: (1)构建的pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体经公司测序及酶切鉴定结果正确。 (2) pcDNA3.1(+)/NspA真核重组载体能有效地在真核细胞中进行转录和表达。 (3)核酸疫苗通过滴鼻和肌注法免疫小鼠后,能够刺激小鼠体内产生特异性抗NspA的抗体,并且抗体水平随免疫时间递增呈上升趋势: ①在免疫后第6周,滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA水平明显高于pcDNA3.1(+)和PBS组(P0.01),pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA相比较无显著性差异(P0.05),pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:3000;肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠生殖道灌洗液中特异性sIgA水平明显高于pcDNA3.1(+)和PBS组(P0.01),而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA相比较无显著性差异(P0.05),pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:1875; ②在免疫后第6周,滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠血清中特异性IgG水平明显高于pcDNA3.1(+)和PBS组(P0.01),而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA相比较无显著性差异(P0.05),pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:3750;肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的小鼠血清中特异性IgG水平明显高于pcDNA3.1(+)和PBS组(P0.01),而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA相比较无显著性差异(P0.05),pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组抗体效价为1:5000; ③经滴鼻和肌注免疫的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组小鼠脾淋巴细胞上清液中的IL-4、IFN-γ含量明显高于pcDNA3.1(+)和PBS组(P0.01),而pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA相比较无显著性差异(P0.05); ④肌注法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的脾淋巴细胞刺激指数(SI,1.45±0.03)显著高于、PBS(0.30±0.01)与pcDNA3.1(+)组(0.44±0.02),,(P0.05);滴鼻法pcDNA3.1(+)/NspA+CpG组的S(I1.55±0.06)明显高于PBS(0.34±0.05)与pcDNA3.1(+)组(0.51±0.04),(P0.05);而肌注法、滴鼻法的pcDNA3.1(+)/NspA+CpG与pcDNA3.1(+)/NspA组相比较无显著性差异(P0.05); (4)核酸疫苗的免疫保护效果:①肌注法: pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA组在72h内的存活率分别为90%、80%;pcDNA3.1(+)组和PBS组24h内的存活率分别为30%和20%,48h内的存活率均为0;②滴鼻法:pcDNA3.1(+)/NspA+CpG、pcDNA3.1(+)/NspA组在72h内的存活率分别为80%、70%,pcDNA3.1(+)组和PBS组24h内的存活率分别为30%和20%,48h内的存活率均为0。 结论: (1)核酸疫苗pcDNA3.1(+)/NspA可诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫和细胞免疫应答; (2)核酸疫苗对B群脑膜炎球菌感染的实验小鼠具有一定的免疫保护作用,肌注途径的免疫保护作用优于滴鼻途径; (3)佐剂CpG对NspA核酸疫苗的免疫活性和保护效果的增强作用不明显。
【关键词】:B群脑膜炎奈瑟菌 奈瑟菌表面蛋白A(NspA) 核酸疫苗 免疫活性 免疫保护
【学位授予单位】:南华大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R392
【目录】:
  • 常用英文缩写4-6
  • 中文摘要6-9
  • ABSTRACT9-12
  • 前言12-14
  • 实验材料14-16
  • 实验方法16-28
  • 实验结果28-41
  • 讨论41-44
  • 结论44-45
  • 参考文献45-48
  • 附录48-52
  • 文献综述52-61
  • 参考文献58-61
  • 研究成果及发表论文61-62
  • 致谢62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

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  本文关键词:B群脑膜炎奈瑟菌NspA核酸疫苗的免疫活性及保护作用的初步研究,由笔耕文化传播整理发布。



本文编号:410620

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