弓形虫ROP2酵母双杂交诱饵表达载体构建及毒性和自激活活性检测

发布时间：2017-06-01 07:18

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【摘要】：目的为筛选弓形虫分泌毒性因子-棒状体蛋白2(ROP2)在终末宿主细胞内的互作因子,构建ROP2的酵母双杂交诱饵表达载体,并检测其表达蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性。方法根据ROP2蛋白的特性选取1~561氨基酸、25~241氨基酸、242~561氨基酸作为目的片段,PCR扩增弓形虫基因组获得3片段,定向克隆到酵母表达载体pGBKT 7上,经测序正确后,将其转化到酵母菌Y187感受态细胞,在缺陷性培养基上观察3个诱饵表达载体在Y187中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活功能。结果成功扩增出ROP2基因的3个目的片段,并将其克隆到诱饵表达载体pGBKT7中,经测序及酶切鉴定结果正确,转化到酵母Y187细胞中的诱饵表达载体无毒性和自激活作用。结论成功获得了对宿主酵母细胞无毒性且未自主激活活性的诱饵表达载体pG-BKT7-ROP2_(1-561)、pGBKT7-ROP2_(242-561)、pGBKT7-ROP2_(25-241),可作为酵母双杂合系统中的"诱饵",为下一步利用酵母双杂交系统筛选ROP2在终末宿主细胞内的相互作用蛋白创造了条件。
【作者单位】： 山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所;
【关键词】： 弓形虫 棒状体蛋白 诱饵表达载体 毒性 自激活活性
【基金】：山东省三院联合基金项目(No.2014ZRC03100) 国家自然科学青年基金(No.31300617) 山东省医药卫生科技发展计划项目(No.WSO370) 山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(博士基金)(No.BS2013SW015)
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 弓形虫病是一种全球性分布、危害严重的人畜共患寄生虫病,我国已有30个省发现人畜感染病例[1]。人类普遍易感,全世界感染率为30%;孕妇感染可造成胎儿死胎、畸形、流产和弱智,免疫缺陷病人感染,可引发全身性的急性弓形虫病,症状伴高烧、寒颤、腹泻甚至死亡,且病死率高[2]。弓形

【参考文献】

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【共引文献】

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2 曾艳波;朱顺海;韩红玉;董辉;姜连连;赵其平;马卫娇;程军;黄兵;;不同保种时间及复苏代次弓形虫对小鼠致病性研究[J];动物医学进展;2011年06期

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3 孔t

本文编号：412034