miRNA138体外抑制C2C12细胞纤维化研究

发布时间：2017-06-01 18:02

  本文关键词：miRNA138体外抑制C2C12细胞纤维化研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠成肌细胞C2C12建立体外纤维化模型,观察miRNA138含量改变对细胞纤维化指标的影响,分析miRNA138对细胞纤维化的影响是否通过其靶基因Smad4实现。方法设计并合成miRNA138-mimics、miRNA138-inhibitor、miRNA138-NC,经脂质体转染至C2C12细胞,转染后细胞再经TGF-β1(10 ng/m L)诱导48 h;Real-time PCR检测胞内miRNA138表达,Western blotting检测胞内纤维化相关蛋白Smad4、vimentin、α-SMA及collagenⅠ表达变化,确认纤维化模型是否成功建立并分析胞内miRNA138表达改变对细胞纤维化指标的影响;CCK-8法检测miRNA138表达改变对纤维化过程中C2C12细胞增殖活性的影响;生物信息学分析miRNA138与Smad4理论结合位点并通过荧光素酶报告基因实验进行验证;构建Smad4基因表达载体,并与miRNA138-mimics共转染C2C12细胞,转染后细胞再经TGF-β1诱导发生纤维化,Western blotting检测细胞纤维化相关蛋白变化,分析外源Smad4表达对于miRNA138抑制细胞纤维化作用的影响。结果 miRNA138-mimics转染C2C12细胞后细胞内miRNA138表达明显上升;miRNA138-inhibitor转染后,C2C12细胞内miRNA138表达下降;转染对照组细胞内miRNA138表达无明显变化;蛋白检测结果显示:TGF-β1诱导C2C12细胞48 h,胞内Smad4、vimentin、α-SMA和collagenⅠ蛋白表达均明显升高,细胞对数生长期增殖活性明显增强,表明细胞纤维化模型成功建立;细胞内miRNA138过表达明显抑制了C2C12细胞纤维化;荧光素酶活性检测数据显示,miRNA138与Smad4的预测靶位是客观存在的;在C2C12细胞内高表达外源Smad4基因,可明显减弱miRNA138-mimics对细胞纤维化相关蛋白的抑制作用。结论 miRNA138可以抑制TGF-β1诱导的C2C12细胞纤维化,是通过抑制其靶蛋白Smad4表达实现的。
【作者单位】： 嘉兴市第二医院骨科;
【关键词】： Smad 纤维化 miRNA CC
【基金】：嘉兴市科技局科技计划项目(2012AY1071-7)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： cells w ith m iRN A-m im ics.T ransfected cells w ere induced by T G F-β1 for fibrosis.T he variations of fibrosisrelated proteins w ere detected by the W estern blotting and the effects of expression of exogenous Sm ad4 on theinhibition of cell fibrosi

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 赵凯;陈姗;龚如军;黎松;何凤田;;GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化[J];第三军医大学学报;2012年19期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈f^明;李云和;侯剑辉;刘钰君;叶博然;黄兆琦;陈盛强;黄庆晖;黄文晖;;糖原合成酶激酶-3β与转化生长因子-β1在慢性充血性心力衰竭中的变化[J];岭南心血管病杂志;2013年04期

【相似文献】

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1 康耀霞;徐卫和;王文瑞;谭雪梅;张义正;;辛伐他汀对C2C12细胞中utrophin基因表达的影响[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）[C];2008年

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本文编号：413142