果蝇中CD133同源基因prominin-like分子功能研究

发布时间：2017-06-02 04:03

  本文关键词：果蝇中CD133同源基因prominin-like分子功能研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：自从1997年CD133在小鼠神经上皮细胞和人造血干细胞中被发现以来,其作为多种细胞的表面分子标记得到了广泛的确认和研究。CD133在各种干细胞,分化的细胞,和肿瘤细胞中都有表达,尤其在多种组织的癌细胞中的广泛表达,使其成为癌症治疗的靶点研究对象。 CD133蛋白为多次跨膜的糖蛋白,特异性聚集分布在细胞膜上的微绒毛、纤毛、中间体等突出物上,并与膜上的脂筏相连。CD133蛋白可包含在膜囊泡中,释放到各组织的体液内,但囊泡的作用尚不清楚。在小鼠和人的CD133突变体中会影响视觉系统的正常发育,造成视觉障碍。目前除了对此突变体表型有清晰的描述之外其他各方面关于CD133的研究大多集中在其与干细胞和肿瘤干细胞的关系上,但其是否只是一个广泛的细胞表面分子标记物,还是与肿瘤的产生有直接或间接的关系一直没有得到确切的认定,CD133的分子功能,具体参与的信号通路也尚未明确。 果蝇中存在两个CD133的同源基因,prominin和prominin-like, prominin突变体表型已有文献报导,同小鼠和人体中类似,果蝇中prominin突变也是影响眼睛正常结构的发育。目前对prominin-like的研究仍是空白,没有其突变体表型和分子功能的相关报道,参与的生物过程更是未知。我们试图通过构建其突变体和制备相应抗体来明确其表型并分析其分子功能,此外构建其过表达载体来制备转基因果蝇,以利用TAP/MS方法来寻找与prominin-like相互作用的蛋白,探寻其可能参与的信号通路。
【关键词】：CD133 果蝇 prominin-like
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R384.2
【目录】：

• 致谢4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 缩写词7-10
• 1 绪论10-15
• 1.1 模式生物果蝇10-11
• 1.2 CD13311-13
• 1.3 果蝇中CD133同源基因13-15
• 2 材料与方法15-33
• 2.1 分子生物学实验15-23
• 2.1.1 DNA实验15-21
• 2.1.2 RNA实验21-23
• 2.2 果蝇实验23-26
• 2.2.1 果蝇的基本操作23
• 2.2.2 实验中所用到的果蝇品系23-24
• 2.2.3 转基因果蝇操作流程24-25
• 2.2.4 果蝇幼虫大脑/成虫盘/脂肪体解剖25
• 2.2.5 胚胎固定25-26
• 2.3 生化试验26-29
• 2.3.1 Western Blot26-27
• 2.3.2 免疫荧光染色27-29
• 2.4 Prominin-like兔抗血清的制备29-32
• 2.4.1 GST-prominin-like融合蛋白表达29
• 2.4.2 蛋白表达条件优化29-30
• 2.4.3 蛋白大量表达30
• 2.4.4 融合蛋白纯化30-31
• 2.4.5 抗体生产(兔免疫抗体)31-32
• 2.5 实验中所用溶液32-33
• 3 实验结果33-48
• 3.1 Prominin-like基因的表达模式33-35
• 3.2 Prominin-like基因的组织特异性功能敲低35-37
• 3.3 Prominin-like基因的过表达37-38
• 3.4 Prominin-like突变体构建38-45
• 3.4.1 Minos转座子基因敲除法38-40
• 3.4.2 TALEN和CRISPR/Cas9基因敲除法40-42
• 3.4.3 FLP-FRT重组法42-45
• 3.5 Prominin-like突变体表型及功能分析45-48
• 4 讨论48-50
• 4.1 prominin-like与果蝇繁殖能力48
• 4.2 prominin-like与脂肪体组织的发育48
• 4.3 prominin-like与细胞自噬48-49
• 4.4 prominin-like与神经干细胞49
• 4.5 prominin-like参与的信号通路49-50
• 参考文献50-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Efficient and Specific Modifications of the Drosophila Genome by Means of an Easy TALEN Strategy[J];遗传学报;2012年05期

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本文编号：414173