肠道病毒71型VP1蛋白在昆虫杆状病毒表达系统的表达

发布时间：2017-06-03 10:22

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【摘要】：目的利用昆虫杆状病毒表达系统表达肠道病毒71型VP1蛋白并对其进行纯化。方法首先通过化学合成法合成EV71 VP1基因,然后将EV71 VP1基因插入到供体质粒pFast Bac1中,构成重组质粒pFast Bac1-VP1,再转入JM190感受态细菌扩增,然后提取重组质粒pFast Bac1-VP1转入DH10BacTM感受态细胞,通过转座从而获得重组质粒bacmid-VP1,采用脂质体Cellfectin Reagent将重组质粒bacmid-VP1转染Sf9细胞。通过SDS-PAGE、Western blot法检测目的蛋白的水平,经镍离子亲和层析,纯化VP1蛋白。结果 SDS-PAGE及Western blot法检测获得蛋白的相对分子质量与预期结果一致。Bradford分析纯化后蛋白的浓度为70μg/m L,纯化度达90%。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达EV71 VP1蛋白。
【作者单位】： 江苏大学检验医学研究所;江苏大学附属人民医院检验科;镇江市疾病预防控制中心检验科;
【关键词】： EV VP蛋白 昆虫-杆状病毒表达系统
【基金】：国家自然科学基金(81101227) 镇江市社会发展项目(SH2012036)
【分类号】：R392
【正文快照】： 肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原之一[1-2],多发生于5岁以下儿童,其最主要临床症状表现为发热,手、足、口腔黏膜等部位出现疱疹。少数患儿可出现严重的与神经系统有关的并发症,如脑干脑炎、脑脊髓炎、无菌性脑

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