结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazEF6缺失突变株的构建及其表型的初步探讨

发布时间：2017-06-03 13:16

  本文关键词：结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazEF6缺失突变株的构建及其表型的初步探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为构建结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazEF6缺失突变株,并对其表型进行初步探讨,首先用聚合酶链反应(PCR)分别从H37Rv标准株和PUC-19K质粒扩增出mazEF6基因的同源臂及卡那霉素抗性基因kan;然后应用融合PCR技术将mazEF6基因的同源臂与kan基因进行杂交拼接,获得目的融合片段,将该融合片段克隆于pMD-19T(simple)载体形成自杀质粒pMD-19T-ΔmazEF6-kan,并将自杀质粒转化至大肠埃希菌DH5α中;最后利用电穿孔技术将自杀质粒电转至H37Rv标准株中,在卡那霉素抗性改良罗氏培养基上筛选H37RvΔmazEF6缺失突变株单个菌落,提取阳性菌株全基因组DNA为模板,PCR扩增克隆片段并测序。将所获得的H37RvΔmazEF6缺失突变株进行遗传稳定性检测后,对其表型进行初步研究。结果显示,该缺失株在15代内未发生回复性突变;与野生株相比,缺失株生长速度缓慢且细菌形态短小。本研究证实,融合PCR技术便于快速获得结核分枝杆菌缺失突变株;结核分枝杆菌在缺失毒素-抗毒素系统mazEF6基因后生存能力下降,这为进一步研究毒素-抗毒素系统的作用奠定了基础。
【作者单位】： 石河子大学医学院病原生物学与免疫学教研室;
【关键词】： 结核分枝杆菌 毒素-抗毒素系统 缺失突变株
【基金】：国家自然科学基金(81160368;81341079)
【分类号】：R378.911
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的最常见的人兽共患慢性传染病。随着结核分枝杆菌耐药率升高、人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiency virus,HIV)合并结核分枝杆菌感染增多,结核病在全球的流行日趋增强。结核分枝杆

【参考文献】

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本文编号：418272