热激蛋白在艰难梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡中的作用研究

发布时间：2017-06-03 16:21

  本文关键词：热激蛋白在艰难梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：传统的研究认为，凋亡是非免疫原性的甚至是免疫耐受的。但是近年来的研究发现一些化疗药物杀死的肿瘤细胞可以在病人的体内激起抗肿瘤的免疫反应，即该化疗药物引起的凋亡是免疫原性凋亡。本课题组之前的研究发现，艰难梭菌分泌的艰难梭菌毒素B，可以诱导CT26细胞发生免疫原性的凋亡。据报道，热激蛋白的膜转位或分泌是免疫原性凋亡的主要特征之一。本课题探讨在艰难梭菌毒素B引起的免疫原性凋亡体系中，是否有HSPs的膜转位或分泌，若有HSPs的膜转位或分泌，则研究其在对在抗肿瘤免疫反应的影响及其在抗肿瘤免疫反应中的作用机制。 本文首先研究本体系中HSPs的分泌或膜转位。用western blot的方法检测TcdB处理CT26细胞后HSPs的胞外分泌情况，用流式细胞术分析HSPs是否外翻到细胞膜上。然后确定HSPs是否贡献与抗肿瘤免疫反应。用动物疫苗模型和体外激活T细胞的实验确定HSPs对于凋亡免疫原性是否有影响。若有作用则用DC吞噬、DC成熟、DC迁移实验来说明HSPs具体在抗肿瘤免疫反应中的哪一个步骤中起作用。研究结果如下： （1）在TcdB引起的免疫原性凋亡体系中，有HSP70和HSP90的胞外分泌但是无HSPs的膜转位。 （2）中和或者抑制HSP70和HSP90的功能后，凋亡的CT26细胞的免疫原性受到影响。 （3）胞外分泌的HSP70和HSP90在体外可以影响DC的成熟，但是不影响DC的吞噬和迁移。 （4）HSPs可以直接通DC表面的TLR4相互作用，这为找到HSPs促进DC成熟的机制提供了线索。 本研究在新的体系下研究HSPs对于免疫原性凋亡的作用，对于免疫原性凋亡机理的发展及基于TcdB的强效抗肿瘤药物的研发具有重要意义。
【关键词】：热激蛋白 艰难梭菌毒素B 免疫原性凋亡 抗肿瘤免疫反应 DC成熟
【学位授予单位】：华南理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 中英文对照和缩略词表11-12
• 第一章 绪论12-21
• 1.1 细胞凋亡及凋亡免疫原性研究12-15
• 1.1.1 细胞凋亡概念及其特征12
• 1.1.2 关于凋亡免疫原性的传统研究12-13
• 1.1.3 免疫原性凋亡及其特征13-15
• 1.2 癌症及癌症治疗15-16
• 1.2.1 癌症疾病现状15
• 1.2.2 癌症治疗方法15-16
• 1.2.3 免疫原性凋亡与肿瘤治疗16
• 1.3 艰难梭菌及其毒素16-18
• 1.3.1 艰难梭菌及其毒素16-17
• 1.3.2 艰难梭菌毒素B的促凋亡特性17-18
• 1.4 HSP及HSP与凋亡免疫原性18-19
• 1.4.1 热激蛋白简介18
• 1.4.2 热激蛋白的免疫学功能18-19
• 1.5 研究意义和创新点19-20
• 1.6 研究内容20
• 1.7 技术路线20-21
• 第二章 TcdB引起的免疫原性凋亡体系中有HSPs的分泌21-33
• 2.1 引言21
• 2.2 实验材料21-22
• 2.2.1 细胞和毒素21
• 2.2.2 主要药品和试剂21-22
• 2.2.3 实验设备和耗材22
• 2.3 实验方法22-27
• 2.3.1 溶液的配制22-24
• 2.3.2 实验器皿的无菌处理24
• 2.3.3 细胞复苏24-25
• 2.3.4 细胞传代25
• 2.3.5 细胞冻存25
• 2.3.6 毒素处理细胞25
• 2.3.7 细胞样品及上清样品收集和处理25-26
• 2.3.8 western blot实验步骤26-27
• 2.3.9 流式细胞仪检测HSPs外翻27
• 2.4 实验结果与讨论27-32
• 2.4.1 TcdB在全细胞水平不引起HSPs表达的变化27-28
• 2.4.2 TcdB引起HSP70，HSP90 的胞外分泌28-29
• 2.4.3 TcdB的浓度不影响HSP70，HSP90 的分泌29-30
• 2.4.4 HSP70 与HSP90 的后继分泌能力30-31
• 2.4.5 TcdB不引起HSP70，HSP90 外翻到膜上31-32
• 2.5 本章小结32-33
• 第三章 HSPs影响凋亡CT26 细胞的免疫原性33-42
• 3.1 引言33
• 3.2 实验材料33-34
• 3.2.1 细胞、毒素及小鼠33
• 3.2.2 主要的药品和试剂33-34
• 3.2.3 主要实验设备及耗材34
• 3.3 实验方法34-39
• 3.3.1 溶液的配制34-35
• 3.3.2 实验器皿的无菌处理35
• 3.3.3 细胞的复苏35
• 3.3.4 细胞传代35
• 3.3.5 细胞冻存35
• 3.3.6 动物的随机编号35-36
• 3.3.7 免疫小鼠的抗原准备及腹股沟注射小鼠36-37
• 3.3.8 活细胞准备及背部皮下注射37
• 3.3.9 肿瘤体积测定37
• 3.3.10 DC细胞的分离37-38
• 3.3.11 脾细胞的制备38
• 3.3.12 肿瘤与DC共孵育体外激活T细胞38
• 3.3.13 Elisa检测38-39
• 3.4 实验结果与讨论39-41
• 3.4.1 HSP70 和HSP90 影响TcdB处理的肿瘤细胞的免疫原性39-40
• 3.4.2 HSPs对于体外肿瘤与DC共孵育激活T细胞起作用40-41
• 3.5 本章小结41-42
• 第四章 HSPs影响DC成熟42-53
• 4.1 引言42
• 4.2 实验材料42-44
• 4.2.1 细胞和毒素及小鼠42
• 4.2.2 主要的药品和试剂42-43
• 4.2.3 实验设备与材料43-44
• 4.3 实验方法44-46
• 4.3.1 溶液的配制44
• 4.3.2 实验材料和器皿的无菌处理44
• 4.3.3 细胞复苏44
• 4.3.4 细胞传代44
• 4.3.5 细胞冻存44-45
• 4.3.6 DC细胞的分离45
• 4.3.7 DC吞噬实验样品准备及流式操作45
• 4.3.8 DC成熟实验样品准备及流式操作45
• 4.3.9 DC迁移实验样品准备及免疫荧光染色45-46
• 4.3.10 免疫共沉淀46
• 4.4 实验结果和讨论46-51
• 4.4.1 HSPs不影响DC的吞噬46-47
• 4.4.2 HSPS影响DC的成熟47-50
• 4.4.3 HSPs不影响DC迁移50
• 4.4.4 HSP70 能与DC表面的TLR4 相互作用50-51
• 4.5 本章小结51-53
• 结论与展望53-55
• 结论53
• 展望53-55
• 参考文献55-60
• 攻读硕士学位期间取得的研究成果60-61
• 致谢61-62
• 附件62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 闫胜祥 ,苑华萍;试论肿瘤治疗方法[J];中国医师杂志;2002年S1期

2 魏于全,田聆;肿瘤免疫与肿瘤免疫治疗中一些新的思考[J];上海免疫学杂志;2001年05期

3 陈敏;曹延粉;李杉;孙丽华;刘婷婷;王菊芳;;重组艰难梭菌毒素B对小鼠结肠癌CT26细胞的诱导凋亡作用[J];微生物学通报;2009年06期

4 张立煌;王青青;;恶性肿瘤免疫治疗的现状及展望[J];浙江大学学报(医学版);2010年04期

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