BPI-LL37抗菌融合蛋白质表达载体的构建与功能鉴定

发布时间：2017-06-04 10:15

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【摘要】：目的构建杀菌/通透性增加蛋白和LL37抗菌蛋白的融合蛋白(BPI-LL37)表达载体,获得针对脓毒症治疗的多效抗菌融合蛋白,为脓毒症治疗提供新的措施。方法通过PCR方法从杀菌/通透性增加蛋白(bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)和LL37基因的c DNA中扩增并修饰获得需要的r BPI21和LL37活性片断,构建r BPI21-LL37/LL37-r BPI21融合蛋白的表达载体,构建的表达载体(p LVX-Tight-Puro)上的BPI和LL37基因之间通过柔性片段(GGSGG)连接。之后使用Poly JetTM体外DNA转染试剂转染人肺腺癌细胞A549。通过Western blot检测真核细胞A549表达融合蛋白的水平,通过抑菌试验验证此融合蛋白的分泌与抗菌能力。结果经限制内酶切酶切、DNA电泳和DNA测序证明融合蛋白表达载体(p LVX-Tight-Puro-BPI-LL-37)构建成功;Western blot检测结果表明融合蛋白r BPI21-LL37/LL37-r BPI21能被真核细胞A549细胞表达,融合蛋白大小介于25~30×103;抑菌试验进一步验证此融合蛋白具有抑制细菌生长的生物学效应。结论构建的两种r BPI21-LL37/LL37-r BPI21表达载体能够成功转染入人的体细胞,并表达和分泌具有抗菌活性的融合蛋白,该融合蛋白有潜力成为治疗脓毒症的新药。
【作者单位】： 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;第三军医大学大坪医院细胞治疗中心;第三军医大学大坪医院ICU;
【关键词】： 抗菌蛋白 融合蛋白 杀菌/通透性增加蛋白 LL 抗菌 脓毒症
【基金】：国家自然基金面上项目(81372059,81372027) 国家重点基础研究发展规划项目(2012GB518105) 重庆市基础与前沿研究计划院士专项项目(CSTC2014JCYJYS0003) 重庆市应用开发(重点)项目(CSTC2014YYKFB10006)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室1,细胞治疗中心2,ICU3)脓毒症是以因感染诱发的全身炎症反应综合征为表现的一组临床综合征,其发病率高,死亡率高,发病率占人口的3%,一旦病情进展至严重脓毒症或脓毒性休克,其病死率高达30%~

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