一种简便的皮层神经元原代培养方法的建立及其培养结果分析

发布时间：2017-06-04 10:22

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【摘要】：目的建立一种简便的皮层神经元原代培养方法,并鉴定其培养效果。方法取出生24 h内的SD大鼠大脑皮层组织,采用胰酶消化法获取神经元细胞悬液,用10%FBS+DMEM高糖培养基接种在经多聚赖氨酸包被的培养板中,4 h后全量换用Neurobasal+2%B27+0.5 mmol/L谷氨酰胺培养液。培养后采用倒置相差显微镜观察神经元形态变化,连续观察8天。神经元培养7~8天进行免疫荧光染色,于激光共聚焦显微镜下对神经元进行鉴定,计算神经元密度和纯度。结果皮层神经元接种时体积小,透亮,呈圆形,单个散在分布。接种后有少量细胞开始贴壁,2 h左右贴壁较多,少量细胞伸出短小的突起;4 h左右已基本贴壁,大量细胞伸出突起,周围光晕明显;培养3天时神经元突起明显伸长,相互交织,细胞透亮,立体感强,呈圆形、椭圆形、梭形;培养5~6天时神经元体积增大,突起交织成网状;培养7~8天时,神经元细胞体饱满,细胞质透亮,细胞核大而明显,细胞体周围折光性强,立体感好,突起交织成致密的网络结构。经免疫荧光染色后鉴定,分离培养的是神经元,密度1.5×106个/m L,纯度90%。结论成功建立了一种操作简便的皮层神经元培养方法,该方法培养的神经元纯度高、密度大,可为今后的相关学科研究提供良好的细胞模型。
【作者单位】： 石河子大学医学院第一附属医院;石河子大学医学院;
【关键词】： 皮层神经元 原代培养 Neurobasal B 细胞模型 新生大鼠
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81360185) 新疆生产建设兵团博士基金资助项目(2011BB016)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 2石河子大学医学院)神经元具有高度分化、很少分裂的特点,从神经突起到成熟神经组织分离出神经元的过程中,神经元会受到不同程度的损伤,因此神经元体外原代培养是一项对实验要求较高、难度较大的培养技术。目前神经元原代培养方法很多,传统方法取材于胎鼠,主要是因为胎鼠胚胎

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