鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用

发布时间：2017-06-07 08:42

  本文关键词：鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。
【作者单位】： 扬州大学:江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【关键词】： 鸡白痢沙门菌 来杭鸡 spiC基因 原核表达 间接ELISA
【基金】：863项目(2011AA10A212) 国家自然科学基金(31230070) 中国博士后基金(2014M551670)
【分类号】：R378
【正文快照】： 鸡白痢(pullorum disease,PD)是由鸡白痢沙门菌(Salmonella pullorum)引起的一种急性、全身性疾病,也是一种常见传染病,能引起雏鸡高发病率和高死亡率,是养鸡业中危害严重的疾病之一,易造成严重经济损失。由于该菌既能水平传播,又能垂直传播,这使得鸡白痢沙门菌难以预防和控制

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本文编号：428626