人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究

发布时间：2017-06-07 12:05

  本文关键词：人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化的潜能，但是经过长期体外培养后，骨髓间充质干细胞增殖分化能力逐渐丧失，其机制仍不明确。 目的： 1.在实验室中分离培养人骨髓间充质干细胞，观察其生长。 2.利用碱性成纤维细胞生长因子及上皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化，观察神经元样分化中细胞形态等一系列变化。 3.初步检测人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化过程中自噬相关基因表达的变化，探讨该基因及其相关意义。 方法： 1.在患者知情条件下抽取骨髓，以肝素抗凝，以Ficoll-Paque密度梯度离心法(无菌通风柜内操作)来获得人单个核细胞，倒置显微镜下进行细胞计数后，以1.0×106/L的细胞浓度接种于6孔板，72h换液1次并去除未贴壁细胞，直到贴壁细胞的融合率大于80%时传代培养，传代比例为1∶2。 2.传代培养至细胞状态稳定后，接种到预铺多聚赖氨酸的玻片上。等到细胞融合率大于50%时，采用碱性成纤维细胞生长因子开始预诱导神经元样分化的进行。 3.利用表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，，观察其形态变化及生长情况。 4.免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶等表达，采用Western blot初步检测诱导前后人骨髓间充质干细胞自噬相关基因Beclin-1表达的变化。 结果与结论： 1.人骨髓间充质干细胞可以于体外培养存活一定时间，并可以于体外环境中接受一定程度的预处理。 2.经预诱导及诱导后，人骨髓间充质干细胞呈典型神经元样细胞分化，神经元特异性烯醇化酶阳性率为78.7%。 3.诱导0.5h后处理组细胞中Beclin-1的表达水平有所增加，但1h后开始逐渐降低。说明体外可以诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，自噬相关基因表达活性可能在诱导分化早期呈高表达，分化过程中逐渐降低。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 分化 神经元 自噬 Beclin-1
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 人骨髓间充质干细胞的分离与培养12-21
• 1. 材料与方法13-17
• 2. 结果17-19
• 3. 讨论19-21
• 第二部分 人骨髓间充质干细胞的神经定向诱导分化21-28
• 1. 材料和方法21-24
• 2. 结果24-26
• 3. 讨论26-28
• 第三部分 诱导细胞中 Beclin-1 的表达28-45
• 1. 材料与方法28-36
• 2. 结果36-38
• 3. 讨论38-45
• 结论45-46
• 参考文献46-52
• 综述52-66
• 参考文献60-66
• 缩略词表66-67
• 攻读学位期间公开发表的论文67-68
• 致谢68-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 邱丽燕,王金福;骨髓间充质干细胞的研究进展[J];生物工程学报;2003年02期

2 孙玉涛;徐立红;;自噬及其在癌细胞中作用机制的研究[J];中国细胞生物学学报;2012年06期

3 马林业;戴国友;刘煜昊;高传玉;;人骨髓间充质干细胞体外培养增殖过程及分化为心肌样细胞后的致瘤性实验[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年14期

4 裴瑛波;;骨髓间充质干细胞分离培养和定向分化的研究现状[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年14期

5 金辉;张蕾;李伟伟;;人骨髓间充质干细胞诱导向多巴胺能神经元的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年36期

6 吴洁莹;廖灿;许遵鹏;陈劲松;辜少玲;;人骨髓间充质干细胞分离鉴定方法的改进[J];中国实验血液学杂志;2006年03期

7 侯玲玲,曹华,白慈贤,魏国荣,张涌,裴雪涛;人骨髓间充质干细胞体外扩增和向神经细胞定向诱导分化的研究[J];自然科学进展;2002年03期

8 刘全;王建军;潘永成;孟利峰;詹曦;郑庆丰;;Beclin1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J];肿瘤防治研究;2008年03期

  本文关键词：人骨髓间充质干细胞神经元样分化中自噬相关基因Beclin-1的表达的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：428981