稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株的建立

发布时间：2017-06-07 15:08

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【摘要】：目的建立能够稳定表达红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-微管相关蛋白轻链3(RFP-GFP-LC3)的小鼠RAW264.7巨噬细胞。方法构建含RFP-GFP-LC3基因的慢病毒重组质粒载体,将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,收集病毒上清后感染RAW264.7细胞。经嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,用荧光显微镜和流式细胞术分析感染效率。饥饿处理稳定感染细胞,荧光显微镜下观察RFP-GFP-LC3斑点。结果成功构建了慢病毒p LV-CMV-RFPGFP-LC3,经感染和嘌呤霉素筛选获得稳定表达RFP-GFP-LC3的RFP-GFP-LC3-RAW264.7细胞;荧光显微镜和流式细胞术显示RFP和GFP荧光率均达到100%,饥饿处理后自噬斑点显著增多。结论成功建立稳定表达RFP-GFP-LC3的RAW264.7细胞株,为自噬研究建立了可靠细胞平台。
【作者单位】： 安徽理工大学医学院医学免疫学与检验教研室;安徽理工大学医学院附属肿瘤医院检验科;
【关键词】： 自噬 慢病毒 RAW.细胞 稳定表达
【基金】：国家自然科学基金(81302524,81202294,81172778) 安徽省自然科学基金(1208085QH162,KJ2013A105) 大学生创新创业训练计划项目(201310361096,AH201310361188,AH201310361189) 安徽理工大学大学生科研项目(2013-2014年)
【分类号】：R392
【正文快照】： 自噬是一个进化上高度保守的进程,从酵母菌细胞到哺乳动物细胞中均已发现[1]。对于一些难以降解的胞内蛋白、细胞器或病原体的过度聚集物,自噬是唯一能有效清除这些聚集体的途径[2]。自噬缺陷会导致一系列疾病,包括癌症、神经退行性疾病和感染性疾病[3-4]。在哺乳动物细胞中,

【参考文献】

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本文编号：429418