基于FRET技术MMP-9生物传感器的构建及鉴定

发布时间：2017-11-13 07:23

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【摘要】：为了构建包含有增强青色荧光蛋白-MMP-9-黄色荧光蛋白(ECFP-MMP-9-YPet)融合蛋白的真核表达质粒MMP-9生物传感器,利用原有质粒Src biosensor和通用载体p MD-18T,通过基因工程的方法构建ECFP-MMP-9-YPet生物传感器并进行鉴定,转染293T细胞24 h后观察转染效率,然后加MMP-3刺激293T细胞,运用荧光共振能量转移(flurorescence resonance energy transfer,FRET)技术在荧光显微镜下观察MMP-9生物传感器的荧光共振能量转移现象。PCR和双酶切鉴定显示,ECFP-MMP-9-YPet生物传感器构建成功,293T细胞转染效率约40%。用免疫荧光法检测MMP-9生物传感器融合蛋白在293T细胞表面膜表达,用MMP-3刺激转染细胞可以检测到FRET现象。结果表明,基于FRET构建的MMP-9生物传感器可以敏感而准确地监测活细胞中MMP-9的表达情况。
【作者单位】： 石河子大学医学院第一附属医院骨科;新疆民族与地方病教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金(批准号:81160225,81260453,81360451) 新疆兵团医药卫生专项资助(批准号:2013BA020) 兵团国际交流与合作专项(批准号:2012BC002,2011BC004) 兵团科技创新团队专项基金(批准号:2014CC002)资助的课题~~
【分类号】：R684.3;TP212.3
【正文快照】： 骨关节炎(osteoarthritis,OA)是最常见的关节疾病,其主要特征是关节软骨退化、软骨下骨反应性增生、关节功能障碍。OA病变的主要机制之一是蛋白酶对软骨的降解,其中基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)[1-2]、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen a

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本文编号：1179689