GDF-5联合淫羊藿素诱导BMSCs向类软骨细胞分化及机制的研究

发布时间：2017-12-16 21:19

  本文关键词：GDF-5联合淫羊藿素诱导BMSCs向类软骨细胞分化及机制的研究

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【摘要】：目的:研究生长分化因子5(growth differentiation factor-5,GDF-5)联合淫羊藿素(Icaritin,ICT)诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向类软骨细胞分化,并进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用。方法:(1)全骨髓贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定细胞生长曲线。(2)取培养至第3代对数生长期的BMSCs进行实验,根据诱导条件不同分为6组:BMSCs组、BMSCs+ICT组、BMSCs+GDF-5组、BMSCs+GDF-5+ICT组、BMSCs+GDF-5+ICT+SB216763组、BMSCs+GDF-5+ICT+XAV-939组,连续诱导培养14d后倒置相差显微镜观察细胞形态学改变。(3)诱导培养14d后,Alcian Blue染色检测细胞的蛋白聚糖改变。(4)诱导培养14d后,采用RT-PCR检测成软骨分化标记基因Aggrecan、COL2、Sox9的表达情况,Western Blot检测COL2蛋白表达水平。(5)诱导培养14d后,RT-PCR检测Wnt/β-catenin信号通路关键组件Dvl1、GSK-3β、β-catenin m RNA表达水平,采用Western Blot检测β-catenin蛋白表达水平。结果:(1)大鼠BMSCs传至P3代,细胞形态基本均一,长梭形或扁平状,呈典型密集旋涡状、鱼群样排列贴壁生长。(2)BMSCs组连续培养14d后,细胞排列紧密,并没有明显的细胞蓝染。BMSCs+ICT组,BMSCs+GDF-5组,BMSCs+GDF-5+ICT组,BMSCs+GDF-5+ICT+SB216763组细胞逐渐缩小,由长梭形逐渐向类圆形转变,并且蛋白聚糖蓝染逐渐加深。但GDF-5+ICT+XAV-939组相对GDF-5+ICT组,细胞形态改变较少,且染色相对较浅。(3)软骨细胞标志检测结果:RT-PCR及Western Blot检测结果分析表明,与BMSCs组相比,BMSCs+GDF-5组和BMSCs+ICT+GDF-5组软骨标记基因Aggrecan、Col2、Sox9表达量及Ⅱ型胶原蛋白表达量均明显增加(P0.05)。与BMSCs+GDF-5组比较,BMSCs+Icaritin+GDF-5联合组Aggrecan、Col2、Sox9基因表达量及Ⅱ型胶原蛋白表达量也增加(P0.05)。(4)Wnt/β-catenin信号通路关键组件检测结果:与BMSCs相比,BMSCs+GDF-5组和BMSCs+ICT+GDF-5组Dvl1基因、β-catenin基因及蛋白表达明显增加,相应的GSK-3βm RNA表达量下降(P0.05);与BMSCs+GDF-5组相比,BMSCs+GDF-5+ICT组Dvl1、β-catenin m RNA表达水平及β-catenin蛋白水平均增加,相应的GSK-3βm RNA表达量下降(P0.05);与BMSCs+ICT+GDF-5组相比,BMSCs+ICT+GDF-5+SB216763组Aggrecan、Sox9和β-catenin m RNA表达量明显增加,GSK-3βm RNA表达量下降,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达也增加(P0.05),相反BMSCs+ICT+GDF-5+XAV-939组Aggrecan、Col2、Sox9和β-catenin m RNA表达量明显减少,Ⅱ型胶原蛋白及β-catenin蛋白表达也减少(P0.05),GSK-3βm RNA表达量增加(P0.05)。结论:(1)GDF-5联合淫羊藿素能够诱导大鼠BMSCs成软骨分化,其中ICT起促进作用。(2)Wnt/β-catenin信号通路在GDF-5联合淫羊藿素诱导大鼠BMSCs成软骨分化过程中发挥正向调控作用。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R684

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：1297501