自体PRP对周围神经断裂再生修复微环境影响的实验研究

发布时间：2018-03-15 17:38

本文选题：富血小板血浆　切入点：兔坐骨神经断裂　出处：《西南医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:通过对周围神经断裂动物模型的建立,用制备的自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)在不同时间点种植于损伤的周围神经局部,研究PRP对周围神经断裂缝合后局部微环境变化的影响。分析周围神经再生修复与局部微环境参数VEG、IGF-1等是否存在量变关系,观察不同时段分次局部给予PRP对周围神经的再生修复是否会产生持续的诱导、促进作用,并用宏观、微观及生化等指标验证PRP对治疗周围神经损伤的可行性,分析其可能存在的原理及机制。为周围神经损伤寻找一种合理、经济、有效、操作便利的治疗方法。方法:1.选取同产地、月龄与体重相当的新西兰大白兔48只,雌雄不限。随机分成四组,A组(假手术组)、B组(NS组)、C组(S-PRP组)、D组(T-PRP组)。2.动物模型建立:2.1先C、D两组每只实验大白兔用带抗凝剂的注射器抽取耳缘静脉血,用Landesberg两次离心法制备PRP,进行血小板检测。2.2全部实验动物:无菌操作,实验兔解剖坐骨神经,A组只做暴露,B、C、D组于梨状肌下缘约1.5cm完全切断,再用8-0显微缝线均匀缝合4针。2.3 B组在神经缝合断端及周围注入生理盐水(NS)0.4ml,C、D组在神经缝合断端及周围注入PRP 0.4ml(C、D组于手术前同上述方法制备PRP备用),缝合术口。术后大白兔非实验侧臀部肌注抗生素预防感染处理3天,限制部分活动,相同生存环境及饲养方法。3.分别术后每周相同时间,在超声引导下,B组在坐骨神经缝合口周缘注射0.4ml NS,D组在坐骨神经缝合口周缘注射0.4ml PRP(其中D组均术前抽取全血,制备PRP待用)。4.观察指标:4.1术后12周,同造模方法解剖所有动物坐骨神经,进行电生理检测。4.2电生理测量完毕,切取坐骨神经断裂缝合处神经段,纵行剖开,其中1/2做标本固定、包埋,制作切片,光镜观察神经轴突再生情况;并做免疫组化染色,观察S-100蛋白表达情况,记录施旺细胞活性。4.3另外1/2神经段做Western Blot记录VEGF、IGF-1表达结果。4.4手术分离腓肠肌,切取约0.1g肌肉组织进行ACh E含量检测。5.SPSS 24.0统计软件包对数据进行统计分析。6.实验标准参考国际或国内权威机构的相关文书。结果:1.静脉全血中血小板平均浓度为304.87×109/L,PRP中平均血小板浓度为1336.42×109/L,PRP中血小板计数为全血中的4.38倍。2.术后12周坐骨神经动作电位(CNAP)在T-PRP组恢复优于NS组和S-PRP组,且有统计学意义(P0.05)。3.在术后12周神经缝合处的细胞因子VEGF和IGF-1在各组均为阳性,统计结果显示VEGF和IGF-1积分光密度值在T-PRP组明显高于其他三组,且有统计学意义(P0.05)。4.术后12周,假手术组及T-PRP组坐骨神经断裂侧腓肠肌中ACh E含量明显高于NS组和S-PRP组,有非常显著性差异(P0.01);NS组与S-PRP组无显著性差异(P0.05);T-PRP组明显高于NS组,组间具有显著性差异(P0.01)。5.术后12周坐骨神经组织中,假手术组、NS组和S-PRP组神经组织内S-100蛋白含量明显低于T-PRP组,有非常显著性差异(P0.01);NS组与S-PRP组无显著性差异(P0.05)。结论:1.在兔坐骨神经断裂局部时间点多次应用PRP可增加坐骨神经局部微环境参数VEGF、IGF-1的含量,以及促进施旺细胞的分裂增殖。2.多频次神经断裂区注射PRP,能促进胆碱能神经递质ACh的合成和释放,可增强周围神经损伤后运动终板的修复,有利于周围神经的再生修复及功能恢复。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R651.3

【参考文献】