MicroRNA-181b调控静脉内皮P65表达抑制深静脉血栓形成的实验研究

发布时间：2018-04-13 09:43

本文选题：miR-181b + 核转录因子κB　；参考：《昆明医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：深静脉血栓形成是心血管系统的常见疾病,其发病率高,并发症肺栓塞可严重威胁患者的生命,因此危害极大。然而,深静脉血栓形成的机制尚未研究清楚,目前最具有代表性学说为Virchow所提出提出的静脉血栓形三大主要因素,包括血流淤滞、血管内皮障碍及血液高凝状态。导致血管内皮障碍的常见原因有炎症、氧化应激、局部机械刺激等。本课题主要就miR-181b、NF-κB、粘附分子(VCAM-1、ICAM-1、E-selectin)等标志物在深静脉血栓形成过程中的作用及相互关系进行试验研究。通过动物造模试验及细胞检测等手段,就上述标志物与深静脉血栓形成的相关机理进行深入探讨。[目的]1、选用SFP级C57BL/6小鼠进行狭窄法造模,分别通过小鼠造模后的成栓率、血栓直径、血栓长度、血栓湿重等指标对比观察miR-181b过表达或抑制组、DVT组腔静脉血栓模型构建后腔静脉血栓形成的变化情况;2、通过实时定量PCR实验检测法检测观察静脉内皮VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等粘附分子的表达变化情况,检测观察静脉内皮P65表达变化;3、探讨miR-181b对DVT形成的影响及可能的其影响机制。[方法]1、选用SPF级C57BL/6小鼠,体重约18-22g,雌雄不限,随机分为6组,每组各20只:正常对照组(Normal组,n=20)、单纯造模组(DVT组,n=20)、miR-181b 过表达组(181b-m, n=20)、miR-181b 抑制组(181b-i, n=20)、miRNA过表达组(NS-m, n=20)、miRNA 抑制组(NS-i, n=20), Normal组及 DVT 组于造模前24h尾静脉注射0.2ml生理盐水;NS-m组于造模前24小时尾静脉注射miRNA mimics 1nmol,NS-i组于造模前24小时尾静脉注射miRNA inhibitor 1nmol,181b-m 组于造模前 24 小时尾静脉注射 miR-181b-1 mimics 1nmol,181b-i组于造模前 24 小时尾静脉注射 miR-181b-1 inhibitor 1 nmol。miRNA mimics、miRNA inhibitor、miR-181b-1 mimics、miR-181b-1 inhibitor 均用 Lipofectamine 2000溶液配制为0.2ml混合液体。2、参考本课题组历年研究经验及相关经典文献报道,采用infrarenal vena cava (IVC)狭窄法构建小鼠腔静脉血栓模型,于造模后24h对小鼠进行解剖,观察小鼠血栓形成情况,留取腔静脉血栓部位静脉壁组织,采用实时定量PCR方法检测静脉内皮miR-181b表达情况,检测P65表达情况,检测VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等粘附分子的表达变化情况;3、采用SPSS 22.0统计学软件分析实验数据,综合分析讨论miR-181b对深静脉血栓形成的影响及其可能的具体影响机制。[结果]1、miR-181b过表达后小鼠的腔静脉血栓成栓率、血栓直径、血栓长度、血栓湿重等指标较DVT组降低;而miR-181b的表达被抑制后小鼠的成栓率、血栓直径、血栓长度、血栓湿重等指标较DVT组明显升高。其差异具有统计学意义(P0.05)。2、miR-181b过表达后小鼠腔静脉内皮VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等粘附分子的表达较DVT组明显降低,而miR-181b的表达被抑制后VCAM-1、E-selectin、ICAM-1等粘附分子表达较DVT组明显升高。其差异具有统计学意义(P0.05)。3、miR-181b过表达后小鼠血栓静脉内皮P65的表达较DVT组减少,而miR-181b的表达被抑制后静脉内皮P65的表达较DVT组明显增加。其差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]1、miR-181b可以抑制小鼠静脉血栓模型的成栓效应。2、miR-181b可以抑制静脉内皮ICAM-1、VCAM-1、E-selectin等粘附分子的表达。3、miR-181b可以抑制静脉内皮P65的表达。4、miR-181b可能通过抑制NF- κ B信号通路的激活及内皮细胞粘附分子的表达来抑制DVT的形成。
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【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R68;R543.6

【参考文献】