【摘要】：背景与目的持续性术后痛是发生在一些常见的外科手术比如开胸术,腹股沟疝修补术,剖宫产术等手术后,发生率为4-13%,持续时间在3-30个月不等。持续性术后痛是一个重要的临床问题,严重降低了病人的生活质量,其发生机制还不明确。目前,离子通道受体在疼痛中的作用越来越受到重视,比如钾离子通道受体、钠离子通道受体等。钠离子受体的其中一个亚型Nav1.7主要表达在周围神经系统脊髓背根神经节神经元中,负责伤害性信号的传入,参与了多种类型的疼痛通路进程,但是在持续性术后痛中的作用机制不清楚。NF-κB是表达在多种类型的细胞中的重要的核转录因子,活化后的NF-κB进入细胞核内通过与目标基因的启动子区结合参与多种基因的调控,p65是NF-κB的一个常见的亚型,并且在疼痛的发生发展中参与了对多种炎症介质的调控。本研究旨在探讨p65,Nav1.7在持续性术后痛中的作用,以及在持续性术后痛模型中p65是否参与对Nav1.7的调控。实验方法首先,我们通过Western blot和免疫荧光染色检测了模型大鼠同侧L4-6 DRG中Nav1.7和p-p65(p65磷酸化)的表达,然后鞘内注射ProTx-II(Nav1.7阻断剂)或PDTC(p65抑制剂),检测Nav1.7蛋白的表达和机械撤足阈值的变化,最后使用免疫共沉淀技术检测p-p65是否可以与Nav1.7基因启动子区结合。通过GraphPad Prism 5.0统计软件对数据进行统计学分析。实验结果1 SMIR(皮肤肌肉切口牵拉)模型诱导了大鼠术侧足底的机械性痛觉过敏incision组和naive组相比,机械撤足阈值没有统计学意义;与incision组相比,SMIR组术侧的机械撤足阈值在术后5天开始下降,直到术后20天;而对侧的机械撤足阈值,SMIR组和incision组相比没有统计学意义;三组之间的热缩足潜伏期没有统计学差异。2 DRG(脊髓背根神经节)中的Nav1.7参与了SMIR模型介导的机械性痛觉过敏Western blot检测结果显示,与术前大鼠相比,术后10天,15天,20天,大鼠术侧L4-6 DRG Nav1.7的表达量明显增高。为了确认是否上调的Nav1.7在SMIR介导的痛觉过敏中起作用,我们通过鞘内注射Nav1.7阻断剂ProTx-II,发现ProTx-II可以有效的缓解SMIR模型介导的机械性痛觉过敏。3 Nav1.7主要表达在CGRP、IB4、NF-200标记的阳性细胞上为了确认Nav1.7在DRG神经元中的表达类型,我们使用了免疫荧光双染的方法,发现Nav1.7与CGRP、IB4、NF-200标记的细胞共标,通过Imagej软件分析,发现80%的Nav1.7阳性细胞是小直径神经元,17%的Nav1.7阳性细胞是中直径神经元,仅有3%的Nav1.7阳性细胞是大直径神经元。4 P-p65在SMIR模型DRG中高表达有研究报道,p-p65参与了神经病理性疼痛和炎性疼痛的进程。本研究中我们检测了DRG中p-p65在SMIR模型介导的持续性术后痛中的作用。我们发现PDTC可以阻止SMIR模型大鼠的机械性痛觉过敏。Western blot检测发现与incision组相比,SMIR模型大鼠术侧L4-6 DRG中的核蛋白p-p65在术后10天、15天高表达,而PDTC预处理可以逆转p-p65的高表达。5 P-p65通过上调大鼠DRG中Nav1.7的表达参与了SMIR模型介导的持续性术后痛我们知道,p65是一种很重要的核转录因子,参与了多种目的基因的转录。为了进一步验证p-p65是否在持续性术后痛中参与了对Nav1.7的调控,我们通过鞘内注射PDTC来检测Nav1.7的表达变化,结果显示,在术后10天和15天,PDTC可以阻止Nav1.7的上调。接着我们做了免疫荧光双染,发现p-p65与CGRP,NF-200和IB-4共表达。免疫共沉淀结果显示,p-p65在引物2,7,8,9可以与SCN9A基因启动子区结合。结论p-p65介导Nav1.7的上调参与了SMIR介导的持续性术后痛。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R614
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