高压电烧伤大鼠血小板因子-5和血小板衍生生长因子变化及乌司他丁的干预作用

发布时间：2020-03-18 21:19

【摘要】：目的:电烧伤渐进性损伤的机制复杂,目前还不明朗。本课题组前期研究发现,电烧伤渐进性损伤与机体微血管损伤、微血流动力学及流变学异常有关。烧伤可使局部创面及远隔组织发生微循环障碍,引起机体组织和器官缺血、缺氧,导致细胞代谢障碍。血小板是血液重要的组成部分,其流变行为异常不仅影响微循环血液流动,还影响微血管结构和功能,其释放反应包括血小板α颗粒、致密颗粒及溶酶体内所含有的大量生物活性物质。PDGF最初从血小板中发现,在损伤早期从血小板α颗粒释放出来,启动并加速组织创伤修复,是创伤愈合过程中较早出现的生长因子之一,主要作用表现在促进创面愈合方面,其中BB型促进愈合能力更强,有助于加强肉芽组织的形成,缩短愈合时间。PF-5同样也是由a颗粒分泌,具有增强止血效果。乌司他丁(Ulinastain,UTI)作为一种广谱蛋白酶抑制剂,临床上主要用于治疗急性胰腺炎、急慢性肺炎、脓毒症、全身炎症反应综合征等,其主要作用是清除氧自由基、抑制炎症介质释放、提高机体免疫力等,经UTI治疗可减轻各种原因所引起的组织细胞炎性损伤,改善组织微循环状态等。UTI无免疫原性、副作用小,对机体的副反应少,易在临床上推广使用。本实验旨在分析高压电烧伤后早期大鼠血清PDGF和PF-5的含量变化,同时给予UTI干预,探讨UTI治疗高压电烧伤及其并发症的可行性。方法:1.实验动物:健康成年SD大鼠,雄性,180只(体重220-310g,证书编号:1411023;购自河北医科大学实验动物中心)。2.分组及给药:采用随机区组设计,将上述大鼠随机分为高压电烧伤盐水组(盐水组)、高压电烧伤组(电伤组)、高压电烧伤UTI治疗组(乌司组),每组60只。将每组中60只大鼠随机分为高压电伤前15min、电伤后5min、1h、2h、4h、8h共6个时相组,每组10只。3.高压电烧伤大鼠模型制备1)实验药物的制备UTI溶液:剂量为2万单位/kg(按大鼠体重计算),注射体积为2ml/kg。水合氯醛:0.3ml/100g(按大鼠体重计算)2)模型制备(1)电击设备电路连接:正确连接电线,检查实验电路安全性及元件和电路准确性。(2)麻醉大鼠:各组大鼠腹腔注射水合氯醛溶液麻醉,注意麻醉深度。(3)模型制作:固定大鼠并联接电路:取麻醉成功后3组大鼠,仰卧位固定在电路绝缘板上,左前肢、右后肢分别连接大小为1cm×1cm电极夹片。左前肢夹片连接火线,右后肢夹片连接零线,则左前肢为电流入口,右后肢为电流出口。闭合电路建立电烧伤模型:确保电路均连接正确,接通电源,调节升压器输出端电压至2kv,接通输出端电路,对实验大鼠实施接触性高压电击,电击时间控制在3s,然后断开升压器输出端电闸,关闭总电源。各组给药:盐水组大鼠腹腔注射生理盐水,注射量为2ml/kg。乌司组大鼠腹腔内注射制备好的UTI(2万单位/kg即2ml/kg)。以上各组大鼠分别记录电击时间点。4.标本采集:对各组相应时相组大鼠进行心脏采血,收集全血约5-6ml,静置约30min,3000转/min,离心10min。离心后取上清液,于-70℃冰箱保存,备用。5.指标检测:ELISA双抗夹心法检测各组各时相大鼠血清中PF-5及PDGF的含量;本实验测得各指标含量以OD值表示,根据试剂说明书绘制标准品拟合曲线,以测得的样品OD值,计算血清中PF-5及PDGF的含量。6.数据分析:实验数据以均数±标准差((?)±s)表示,采用SPSS21.0统计软件进行统计分析。行两因素析因设计资料的方差分析,多重比较采用LSD-t检验,以P0.05为具有显著性差异。结果:1.大鼠PDGF的含量变化电伤组大鼠血清PDGF总体含量与盐水组比较,(F=14.707,P0.05),差异有统计学意义,电伤组大鼠血清中PDGF含量与盐水组大鼠血清中PDGF含量不同;电伤后不同时相组大鼠血清PDGF含量差异有统计学意义(F=14.180,P0.05),2h、8h较高。(Fig1、Table 1)。乌司组电伤后各时相大鼠血清PDGF总体含量与盐水组比较,(F=17.407,P0.05),差异有统计学意义,乌司组大鼠血清中PDGF含量与盐水组大鼠血清中PDGF含量不同;不同时相大鼠血清PDGF含量比较,差异有统计学意义(F=17.587,P0.05),1h、2h较高。(Fig1、Table 1)。2.大鼠PF-5的含量变化电伤组与盐水组比较,大鼠血清PF-5总体含量与盐水组差异有统计学意义(F=9.571,P0.05),电伤组大鼠血清中PF-5含量与盐水组大鼠血清中PF-5含量不同;电伤组大鼠伤后不同时相血清PF-5含量差异有统计学意义(F=9.515,P0.05),5min、2h、8h较高。乌司组与盐水组比较,大鼠血清PF-5总体含量与盐水组差异有统计学意义(F=15.170,P0.05),乌司组大鼠血清中PF-5含量与盐水组大鼠血清中PF-5含量不同;不同时相大鼠PF-5含量差异有统计学意义(F=16.381,P0.05),1h、2h、8h较高。(Fig2、Table 2)。结论:1.高压电烧伤可导致大鼠血液中PDGF含量升高,其含量在伤后8小时内随时间变化呈现逐渐增高趋势。2.高压电烧伤可导致大鼠血液中PF-5含量升高,其含量在伤后8小时内随时间变化呈现逐渐增高趋势。3.高压电烧伤早期应用UTI治疗会降低电伤后大鼠血液中PDGF和PF-5含量,促进电伤后创伤组织修复。但UTI降低PDGF和PF-5含量的程度与具体方式需进一步探索。
【图文】：

图 1 电伤组大鼠血清中 PDGF 含量与盐水组的比较Fig.1 The compare of Rat PDGF content between control groupelectrical-injury groupNote: Compared with saline group * P<0.05**

图 1 电伤组大鼠血清中 PDGF 含量与盐水组的比较g.1 The compare of Rat PDGF content between control groupelectrical-injury groupNote: Compared with saline group * P<0.05**
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R647

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