P-PRP与L-PRP对兔椎间盘髓核来源间充质干细胞生物学特性影响的比较

发布时间：2020-03-29 11:43

【摘要】：目的:比较去白细胞富血小板血浆(P-PRP)与含白细胞富血小板血浆(L-PRP)对兔椎间盘髓核来源间充质干细胞(NPMSCs)增殖、分化、细胞外基质和NF-κB信号通路激活的影响。方法:实验选取24只雌性,6-8个月龄,体重3-4kg新西兰大白兔。每只大白兔分别抽取30ml动脉血,随机分为对照组、P-PRP组和L-PRP组。随后提取兔椎间盘髓核来源间充质干细胞并鉴定。选取P2 NPMSCs在transwell细胞小室中与对应的不同浓度(0%、5%、10%和20%Vol/Vol)的PRPs(P-PRP或L-PRP)共培养三天后,CCK-8检查各组细胞增殖率。再选取各组P2细胞,分别加入各组对应的培养基(普通培养基、10%P-PRP、10%L-PRP)共培养。14天后,使用实时定量荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)测定各组细胞MSCs干性基因(Oct4,Nanog)、髓核细胞相关基因(Collagen II,Aggrecan)、炎症因子(TNF-α,IL-1β)以及基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA法)测定TNF-α、IL-1β、MMP-1和MMP-13浓度;Western Blot检测NF-κB/p65、Collagen II以及Aggrecan蛋白表达;免疫荧光实验检测各组细胞Collagen II以及Aggrecan蛋白表达。结果:NPMSCs与PRPs共培养后,其增殖率表现出对PRPs剂量依赖性,其中在PRPs浓度10%时细胞增殖率最大(P0.05)。共培养两周后,实验组(P-PRP组或L-PRP组)细胞形态由纺锤形样细胞逐渐转变成瘦长梭形髓核样细胞,同时,实验组干细胞标志基因(Oct-4,Nanog)的表达是对照组的30%,而髓核细胞胞相关基因(CollagenII,Aggrecan)的表达,是对照组3至4倍(P0.05)。L-PRP中白细胞和炎症因子浓度(TNF-α,IL-1β)明显高于P-PRP组(P0.05)。与P-PRP组相比,L-PRP组细胞中炎症因子(TNF-α,IL-1β)、基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-13)以及NF-κB p65表达明显增多(P0.05)。P-PRP组细胞外基质相关蛋白(Collagen II,Aggrecan)表达明显高于L-PRP组(P0.05)。结论:P-PRP和L-PRP均可以促进NPMSCs增殖并诱导其成髓核样细胞分化,剔除PRP中白细胞可以减少炎症反应,避免细胞NF-κB信号通路的激活以及抑制细胞分解代谢反应。
【图文】：

全血,白细胞,成分,浓度

结果与分析结果与分析RP 和全血成分上述来自各组新西兰大白兔全血、P-PRP 和 L-PRP 经自动血液分析提示：L-PRP 中的白细胞浓度显著高于全血（P＜0.05），而 P-PRP 中度显著低于全血（P＜0.05）（图 1a）；P-PRP 和 L-PRP 之间的血小板统计学差异（P＞0.05）（图 1b）且 P-PRP 和 L-PRP 血小板浓度均高。酶联免疫吸附实验（ELISA）结果反应，L-PRP 中，炎症因子 Tβ 明显升高，如图 1（c）和（d）所示，L-PRP 中 IL-1β和 TNF-α的水全血和 P-PRP，而 P-PRP 中 IL-1β和 TNF -α含量明显低于全血。

间充质干细胞,来源,细胞集落,形态

东南大学硕士学位论文椎间盘髓核来源间充质干细胞形态学观察从新西兰大白兔椎间盘髓核以 50/cm2接种到一次性塑料培养瓶，加20% FBS、1%双抗和 LG-DMEM），置于 37℃，5%C02静置培养，经 14 天培养，细胞贴壁，倒置显微镜下观察细胞形成葵花样细胞集落不一，以多角形和长梭形两种细胞形态为主（图 2a），传代后 P1 代细胞克隆实验可见多个散在分布的细胞集落（图 2b），，P2 代细胞形态纺锤形，并以“铺路石”样形态生长（图 2c、d）。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R681.5

【参考文献】