人脂肪和滑膜来源间充质干细胞协同抑制炎性软骨细胞的退变
发布时间：2020-04-03 04:26
【摘要】：背景和目的膝关节骨性关节炎早期病程中的软骨细胞是炎性软骨细胞。抑制软骨细胞炎症、促进其修复再生是治疗早期骨性关节炎软骨细胞退变的两个重要机制,但目前尚不清楚两者之间的内在联系。我们前期研究发现,脂肪来源间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells ADMSCs)可抑制炎症反应而滑膜来源间充质干细胞(Synovium derived mesenchymal stem cells SDMSCs)可再生软骨细胞。本实验探讨联合应用脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞的退变具有协同抑制作用。方法原代培养脂肪和滑膜来源间充质干细胞。体外二维培养条件下,MTS(细胞增殖实验)检测三种细胞的增殖情况。通过定量PCR及免疫荧光分析三种贴壁细胞基因水平及蛋白水平的成软骨标志物的差异。体外三维混合培养条件下,分三组:1.ADMSCs+炎性软骨细胞组(A+C组)2.SDMSCs+炎性软骨细胞组(S+C组)3.ADMSCs-SDMSCs+炎性软骨细胞组(A+S+C组)。混合培养的细胞团块石蜡切片做Alcian blue(阿尔新蓝)、Safranin O(番红O)染色及II型胶原免疫组化染色,并做定量分析,收集三组细胞团块作定量PCR检测成软骨分化的标志物,同时消化细胞团块进行细胞计数,并作统计学分析。收集不同时间段的培养液上清通过酶联免疫吸附技术(ELISA)检测促炎及抗炎因子的分泌情况。所得实验数据以均数±标准差(sx±)表示,用SPSS 20.0处理数据并进行统计分析,用成组t检验分析定量资料,纵向组间差异比较应用多样本均数单因素方差分析。结果通过MTS细胞增殖实验发现ADMSCs的增殖速率炎性软骨细胞和SDMSCs,且具有统计学差异(P0.05)。定量PCR检测发现贴壁培养条件下,炎性软骨细胞的成软骨标志物II型胶原及蛋白聚糖表达量明显高于另外两种细胞(P0.01)。细胞爬片II型胶原免疫荧光定量分析炎性软骨细胞组明显高于另外两组(P0.01)。A+S+C组的成软骨分化的特异性染色均明显高于另外两组(阿尔新蓝染色A+C组6.2±0.1,S+C组36.2±0.21,A+S+C组54.7±0.43番红O染色,A+C组14.2±0.15,S+C组37.7±0.4,A+S+C组58.8±0.13 II型胶原免疫组化A+C组13.6±0.24,S+C组30.1±0.35,A+S+C组54.6±0.27)(P0.05)。收集3D培养细胞上清,ELISA检测发现促炎因子IL-1,IL-6,TNFα在S+C组明显高于A+C组及A+S+C组,抗炎因子IL-10在A+C组及A+S+C组明显高于S+C组且具有明显的统计学差异(P0.05)。细胞团块作定量PCR发现成软骨分化标志物蛋白聚糖及II型胶原表达量为:A+S+C组明显高于另外两组,且具有明显的统计学差异(P0.01)。细胞团块消化计数后发现:14d后A+S+C组S+C组A+C组,且具有明显的统计学差异(P0.05)。结论1.体外二维培养条件下,滑膜来源间充质干细胞和脂肪来源间充质干细胞成软骨分化能力差。2.体外3D培养条件下,滑膜来源间充质干细胞具有强大的成软骨分化的能力,脂肪来源间充质干细胞具有强大的抗炎作用。3.联合应用脂肪来源间充质干细胞和滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞退变具有协同抑制作用。
【图文】：
图 1A 显示 ADMSCs、SDMSCs、炎性软骨细胞在不同倍数显微镜（40X、200X）下 1B 显示三种贴壁细胞在不同时间点细胞增殖情况，通过 MTS 细胞增殖实验发现dADMSCs 和 SDMSCs 的增殖速率开始大于炎性软骨细胞，（ADMSCs1.3±0.2，SDMS.1±0.1，炎性软骨细胞 0.7±0.1）具有统计学差异（P＜0.05）。但是前两者之间并无统计异（P＞0.05），从第 4d 开始三种细胞的增殖速率 ADMSCs＞SDMSCs＞炎性软骨细胞ADMSCs 1.65±0.1，SDMSCs 1.3±0.2，炎性软骨细胞 1.0±0.1），结果具有明显的统计
图 2A 及 2B 显示炎性软骨细胞的成软骨标志物 II 型胶原蛋白及蛋白聚糖在 mRNA 水平的表达量要高于 SDMSCs 和 ADMSCs，（图 2A. ADMSCs 0.0021±0.00024，SDMSCs0.0024±0.00011，炎性软骨细胞 0.0054±0.00021。图 2B.ADMSCs 0.18±0.02，，SDMSCs 0.19±0.01，炎性软骨细胞 0.52±0.014）且具有明显的统计学差异（P＜0.01）。图 C 显示三种细胞II 型胶原免疫荧光染色的显微镜下观（40X），通过图 D 的定量分析显示炎性软骨细胞在蛋白水平表达的 II 型胶原明显高于 SDMSCs 和 ADMSCs（ADMSCs 0.92±0.03，SDMSCs9.47±0.05，炎症软骨细胞 78.64±0.07），具有明显的统计学差异（P＜0.01），而 SDMSCs
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684.3
本文编号：2612933
【图文】：
图 1A 显示 ADMSCs、SDMSCs、炎性软骨细胞在不同倍数显微镜（40X、200X）下 1B 显示三种贴壁细胞在不同时间点细胞增殖情况，通过 MTS 细胞增殖实验发现dADMSCs 和 SDMSCs 的增殖速率开始大于炎性软骨细胞，（ADMSCs1.3±0.2，SDMS.1±0.1，炎性软骨细胞 0.7±0.1）具有统计学差异（P＜0.05）。但是前两者之间并无统计异（P＞0.05），从第 4d 开始三种细胞的增殖速率 ADMSCs＞SDMSCs＞炎性软骨细胞ADMSCs 1.65±0.1，SDMSCs 1.3±0.2，炎性软骨细胞 1.0±0.1），结果具有明显的统计
图 2A 及 2B 显示炎性软骨细胞的成软骨标志物 II 型胶原蛋白及蛋白聚糖在 mRNA 水平的表达量要高于 SDMSCs 和 ADMSCs，（图 2A. ADMSCs 0.0021±0.00024，SDMSCs0.0024±0.00011，炎性软骨细胞 0.0054±0.00021。图 2B.ADMSCs 0.18±0.02，，SDMSCs 0.19±0.01，炎性软骨细胞 0.52±0.014）且具有明显的统计学差异（P＜0.01）。图 C 显示三种细胞II 型胶原免疫荧光染色的显微镜下观（40X），通过图 D 的定量分析显示炎性软骨细胞在蛋白水平表达的 II 型胶原明显高于 SDMSCs 和 ADMSCs（ADMSCs 0.92±0.03，SDMSCs9.47±0.05，炎症软骨细胞 78.64±0.07），具有明显的统计学差异（P＜0.01），而 SDMSCs
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684.3
【参考文献】
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1 Justin D Glenn;Katharine A Whartenby;;Mesenchymal stem cells: Emerging mechanisms of immunomodulation and therapy[J];World Journal of Stem Cells;2014年05期
本文编号：2612933
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/2612933.html
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