替西罗莫司对同种异体器官移植的免疫抑制作用及机制研究

发布时间：2020-05-22 00:24

【摘要】：目的:器官移植是目前治疗器官衰竭以及终末期疾病的有效途径,但器官移植术后的的免疫排斥反应极大的制约着器官移植的发展。接受器官移植术后的患者因为免疫排斥反应的存在需要长时间服用免疫抑制药物,然而现在各种免疫抑制药物及制剂不但效果不理想且毒副作用明显。此外,很多免疫抑制药物在用于治疗器官移植术后排斥反应的同时,又诱发了肿瘤和各种疑难并发症,极大的影响患者术后的生活质量。因此,新型理想免疫抑制剂的开发是解决移植术后排斥反应的急切需求。本研究首次将雷帕霉素衍生物替西罗莫司应用于器官移植领域,探究替西罗莫司的免疫抑制效果及其可能产生的机制。方法:采用小鼠颈部套管法建立从供体小鼠BalB/C到受体小鼠C57BL/6的同种异体心脏移植模型,通过替西罗莫司灌胃给药组与空白液灌胃给药组来对比心脏移植物生存期的长短,进而探索替西罗莫司能否延长移植物生存期。接着进行淋巴细胞转化实验和混合淋巴细胞培养实验来摸索替西罗莫司是否抑制脾脏T细胞的活化增殖。进一步通过流式细胞术检测调节性T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19+B细胞的比例变化来探究替西罗莫司对T、B细胞亚群改变的影响。通过ELISA实验以及qPCR实验等对相关细胞因子IL-4、IL-10、IFN-y、TGF-β的转录水平以及表达水平进行检测,进一步研究替西罗莫司抑制淋巴细胞免疫应答以及延长移植物生存期的机制。结果:替西罗莫司给药组心脏移植物生存期天数较对照组明显延长,且适宜浓度范围的替西罗莫司对受体小鼠的体重无明显影响。替西罗莫司给药组,脾脏T淋巴细胞数量明显下降;且CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19+B细胞比例有一定程度的降低;血清中供者特异性抗体IgG1、IgG2、IgM有较为明显的较少;脾脏、淋巴结中Treg细胞的比例有较为明显升高。替西罗莫司给药组进一步实验检测发现相关细胞因子IL-4、TGF-β、Foxp3和IL-10都呈现出明显升高趋势,细胞因子IFN-γ呈现明显降低趋势。在替西罗莫司停药实验中发现,停药组移植物生存期天数较持续给药组明显缩短。结论:替西罗莫司延长小鼠同种异体心脏移植的生存期,减轻移植物心脏炎性细胞浸润程度,具有良好的免疫抑制功能。替西罗莫司抑制受体小鼠的细胞免疫,并且也通过抑制IgG1、IgG2、IgM等抗体生成来抑制受体小鼠的体液免疫;同时可促进Treg细胞的产生以及相关细胞因子TGF-β、Foxp3和IL-10的表达来诱导受体小鼠移植物达到长期存活状态。本研究首次探讨了雷帕霉素衍生物替西罗莫司在小鼠同种异体心脏移植中的免疫抑制效果,为开发既能抗肿瘤又能抗排斥的新型理想免疫抑制剂提供了可能,具有深远的临床应用意义。
【图文】：

西罗莫司,同种异体心脏移植,小鼠

从而来研究这一问题。首次记录受体小鼠体重的时间为移植术后６－８小时，逡逑之后每间隔２４小时称量并记录其体重；相关分组及平均体重数据如表３．２示。逡逑如图３．３ａ所示，移植术后连续给药８天内，中、低浓度替西罗莫司给药组逡逑与对照组相比：小鼠平均体重变化趋势相同，说明中、低浓度替西罗莫司给药不逡逑影响受体小鼠移植术后的体重；但高浓度的替西罗莫司给药组与对照组相比，，小逦｜逡逑鼠平均体重变化趋势存在明显差异，说明高浓度替西罗莫司给药会影响小鼠体重逡逑的改变；总的来说，适宜浓度的替西罗莫司对小鼠体重改变无影响。如图３．３ｂ逡逑所示，适宜浓度（中浓度）替西罗莫司长时间给药直到耐受（移植物生存期达到逡逑１００天及以上），受体鼠１、２、３术后体重并不会降低且呈现上升趋势最终趋于逡逑稳定，说明适宜浓度的替西罗莫司不影响术后小鼠的健康状态。逡逑３１逡逑

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逦８０逦１００逡逑Ｄａｙｓ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ邋（ｄ）逡逑图３．２替西罗莫司对小鼠同种异体心脏移植生存期影响逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．２邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ邋ｏｎ邋ｓｕｒｖｉｖａｌ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ａｌｌｏｇｒａｆｔ邋ｈｅａｒｔ邋ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ逡逑３．１．３替西罗莫司对同种异体心脏移植术后小鼠健康状态的影响逡逑不同浓度替西罗莫司给药是否会对受体移植术后的健康状态产生影响？本逡逑实验根据每天记录小鼠体重变化的数据进行统计分析并描制小鼠体重变化曲线逡逑图，从而来研究这一问题。首次记录受体小鼠体重的时间为移植术后６－８小时，逡逑之后每间隔２４小时称量并记录其体重；相关分组及平均体重数据如表３．２示。逡逑如图３．３ａ所示，移植术后连续给药８天内，中、低浓度替西罗莫司给药组逡逑与对照组相比：小鼠平均体重变化趋势相同，说明中、低浓度替西罗莫司给药不逡逑影响受体小鼠移植术后的体重；但高浓度的替西罗莫司给药组与对照组相比，小逦｜逡逑鼠平均体重变化趋势存在明显差异，说明高浓度替西罗莫司给药会影响小鼠体重逡逑的改变；总的来说，适宜浓度的替西罗莫司对小鼠体重改变无影响。如图３．３ｂ逡逑所示，适宜浓度（中浓度）替西罗莫司长时间给药直到耐受（移植物生存期达到逡逑１００天及以上）
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R617

【参考文献】