甘氨酸受体在缺氧大鼠心肌细胞内质网上的表达研究

发布时间：2020-06-02 02:16

【摘要】：目的:研究甘氨酸受体与大鼠心肌细胞内质网的共定位关系,及缺氧和甘氨酸处理对大鼠心肌细胞甘氨酸受体和内质网共定位的影响方法:实验分二部分进行:第一部分:选用大鼠心肌细胞系H9C2细胞,用蛋白免疫印迹(Western blot)检测甘氨酸受体α1(Gly Rα1)在缺氧及甘氨酸干预下的表达情况及其在内质网上的表达情况。第二部分:选用大鼠心肌细胞系H9C2细胞,用免疫荧光染色与激光共聚焦显微镜观察甘氨酸受体α1(Gly Rα1)与心肌细胞内质网的共定位关系。结果:1)缺氧及甘氨酸对心肌细胞甘氨酸受体α1(Gly Rα1)表达的影响结果显示:缺氧可明显引起心肌细胞内甘氨酸受体α1蛋白表达增高,而甘氨酸处理大鼠心肌细胞不同时间后,甘氨酸受体α1表达有短暂升高趋势。处理6h和12h后,甘氨酸受体α1与0h相比具有显著意义(p0.05),且甘氨酸对缺氧造成的甘氨酸受体α1表达升高有一定的抑制作用。2)心肌细胞内质网上存在甘氨酸受体α1(Gly Rα1)。3)甘氨酸受体α1(Gly Rα1)与内质网(ER)共定位研究结果显示:甘氨酸受体α1(Gly Rα1)与内质网存在共定位现象,且缺氧组(Hyp组)甘氨酸受体α1(Gly Rα1)的表达量较高,甘氨酸组(Gly组)表达较弱,将缺氧处理的刺激细胞用甘氨酸处理后,缺氧促进甘氨酸受体α1(Gly Rα1)的表达增加的趋势被明显抑制。结论:缺氧可以引起大鼠心肌细胞中甘氨酸受体的表达明显增多,而甘氨酸可以通过与甘氨酸受体结合抑制其表达,且甘氨酸可以有效地减少心肌细胞的凋亡率,共定位研究结果显示大鼠心肌细胞内质网膜上存在甘氨酸受体,且在缺氧6h时内质网甘氨酸受体α1表达明显增高,说明甘氨酸可以通过与内质网甘氨酸受体α1结合发挥细胞保护作用,其具体机制仍需进一步实验研究。
【图文】：

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软件扫描并测定灰度值。计方法统计分析均采用 SPSS16.0（SPSS 公司，美国）软件完成，所有检测数据表示±标准差，所有计量资料以x± s 表示，每组 3 个平行重复（n=3），每种 3 次，所有数据不同组间差异采用单因素方差分析（One-way ANOVA），组间用 LSD 检验法（方差齐），P＜0.05 为差异有统计学意义。果4.1 大鼠心肌细胞系 H9C2 细胞形态及凋亡情况由图 1 所示，对于 Hyp 组，随着缺氧时间的增加，心肌细胞凋亡个数逐渐增24h 时，细胞出现大面积凋亡。对于 Gly 组，随着处理时间增加，，死亡的细胞显变化，说明该浓度下 Gly 对心肌细胞的存活无影响。对于 Hyp + Gly 组，的增加，心肌细胞凋亡个数有所增加，但显著低于 Hyp 组，说明 Gly 对缺氧鼠心肌细胞的凋亡具有明显保护作用。

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心肌细胞在缺氧和 Gly 处理后的细胞凋亡率，( x ±SD，n=3)，**P<0.01氧对大鼠心肌细胞 Gly Rα1 表达影响所示，缺氧处理大鼠心肌细胞不同时间后，Gly Rα1 表达逐渐24h 和 48h 后，与 0h 相比具有显著意义（p<0.01）。
【学位授予单位】：甘肃中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R644

【参考文献】