内皮祖细胞条件培养基对脂肪干细胞成骨分化的影响
发布时间：2020-06-05 20:19
【摘要】：目的探究SD大鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(EPC-CM)对脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化能力的影响。方法体外分离、培养、扩增并鉴定SD大鼠ADSCs与EPCs。实验设置3个不同浓度的EPC-CM培养ADSCs,分别为对照组(不含EPC-CM)、50%EPC-CM组和100%EPC-CM组。采用CCK-8检测各组ADSCs的增殖活性;采用茜素红及碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色定性检测各组ADSCs的成骨分化能力;使用ALP及钙离子定量检测比较各组ADSCs成骨分化能力。结果免疫荧光检测提示ADSCs高表达表面特异性蛋白CD90,且经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化。第2代EPCs高表达CD133和血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2);在铺有基质胶的96孔培养板中可形成管腔样结构,能够特异性地摄取乙酰化低密度脂蛋白和FITC-UEA-1。与对照组相比,50%EPCCM组和100%EPC-CM组ADSCs增殖活性均明显增加,且与EPC-CM浓度相关(P0.05)。ALP定量检测培养14 d及21 d后50%EPC-CM组和100%EPC-CM组ADSCs的ALP活性均高于对照组(P0.05)。培养14 d和21 d后,50%EPC-CM组和100%EPC-CM组钙离子含量均高于对照组(P0.05)。结论 EPC-CM能够促进ADSCs的增殖与成骨分化能力,为阐明血管化细胞影响骨形成的机制提供了一定依据。
【图文】：
?-1(图2D)，表明目的细胞为EPCs。2．2ADSCs的培养和鉴定ADSCs于48h贴壁，原代细胞形态不均一，，呈成纤维细胞样的长梭形(图3A)。培养48h后可见集落形成;培养约7d时细胞铺满，经传代培养后形态逐渐均一呈“旋涡”(图3B)。CCK-8检测ADSCs增殖曲线与文献［6］报道的ADSCs生长趋势一致。第二代ADSCs免疫荧光鉴定显示:CD90阳性(图3C、3D)。经诱导分化培养后能向成骨、成脂及成软骨方向分化(图4)。表明目的细胞为ADSCs。图1EPCs形态学鉴定×100A:EPCs原代培养7d;B:DAPI细胞核染阳性;C:FITC标记的VEGFＲ-2染色阳性;D:TＲITC标记的CD133染色阳性图2EPCs的功能鉴定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI细胞核染阳性×200;C:摄取乙酰化低密度脂蛋白能力(阳性)×200;D:结合FITC-UEA-1能力(阳性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法检测ADSCs增殖能力:生长培养基培养ADSCs可见ADSCs增殖曲线与文献报道一致(图5A)。随着EPCs条件培养安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·
杉鉯狩湫纬?培养约7d时细胞铺满，经传代培养后形态逐渐均一呈“旋涡”(图3B)。CCK-8检测ADSCs增殖曲线与文献［6］报道的ADSCs生长趋势一致。第二代ADSCs免疫荧光鉴定显示:CD90阳性(图3C、3D)。经诱导分化培养后能向成骨、成脂及成软骨方向分化(图4)。表明目的细胞为ADSCs。图1EPCs形态学鉴定×100A:EPCs原代培养7d;B:DAPI细胞核染阳性;C:FITC标记的VEGFＲ-2染色阳性;D:TＲITC标记的CD133染色阳性图2EPCs的功能鉴定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI细胞核染阳性×200;C:摄取乙酰化低密度脂蛋白能力(阳性)×200;D:结合FITC-UEA-1能力(阳性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法检测ADSCs增殖能力:生长培养基培养ADSCs可见ADSCs增殖曲线与文献报道一致(图5A)。随着EPCs条件培养安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·
【图文】：
?-1(图2D)，表明目的细胞为EPCs。2．2ADSCs的培养和鉴定ADSCs于48h贴壁，原代细胞形态不均一，，呈成纤维细胞样的长梭形(图3A)。培养48h后可见集落形成;培养约7d时细胞铺满，经传代培养后形态逐渐均一呈“旋涡”(图3B)。CCK-8检测ADSCs增殖曲线与文献［6］报道的ADSCs生长趋势一致。第二代ADSCs免疫荧光鉴定显示:CD90阳性(图3C、3D)。经诱导分化培养后能向成骨、成脂及成软骨方向分化(图4)。表明目的细胞为ADSCs。图1EPCs形态学鉴定×100A:EPCs原代培养7d;B:DAPI细胞核染阳性;C:FITC标记的VEGFＲ-2染色阳性;D:TＲITC标记的CD133染色阳性图2EPCs的功能鉴定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI细胞核染阳性×200;C:摄取乙酰化低密度脂蛋白能力(阳性)×200;D:结合FITC-UEA-1能力(阳性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法检测ADSCs增殖能力:生长培养基培养ADSCs可见ADSCs增殖曲线与文献报道一致(图5A)。随着EPCs条件培养安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·
杉鉯狩湫纬?培养约7d时细胞铺满，经传代培养后形态逐渐均一呈“旋涡”(图3B)。CCK-8检测ADSCs增殖曲线与文献［6］报道的ADSCs生长趋势一致。第二代ADSCs免疫荧光鉴定显示:CD90阳性(图3C、3D)。经诱导分化培养后能向成骨、成脂及成软骨方向分化(图4)。表明目的细胞为ADSCs。图1EPCs形态学鉴定×100A:EPCs原代培养7d;B:DAPI细胞核染阳性;C:FITC标记的VEGFＲ-2染色阳性;D:TＲITC标记的CD133染色阳性图2EPCs的功能鉴定A:EPCs具有成血管能力×100;B:DAPI细胞核染阳性×200;C:摄取乙酰化低密度脂蛋白能力(阳性)×200;D:结合FITC-UEA-1能力(阳性)×2002．3ADSCs的增殖活性CCK-8法检测ADSCs增殖能力:生长培养基培养ADSCs可见ADSCs增殖曲线与文献报道一致(图5A)。随着EPCs条件培养安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2018May;53(5)·927·
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 杨姣;夏雷;汤郁;陆化;费小明;;肿瘤坏死因子预处理促进骨髓间充质干细胞成骨分化潜能[J];南京医科大学学报(自然科学版);2014年03期
2 王晶;张洹;;-80℃一步法冻存对成人骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响[J];广东医学;2007年03期
3 王浩;陈森;马雨洪;姚惟琦;;降钙素基因相关肽对滑膜来源间充质干细胞增殖与成骨分化的调控作用[J];山东医药;2014年23期
4 王伟;赵建华;;锶对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响[J];解放军医学杂志;2010年04期
5 周娅蕾;罗二平;申广浩;吴小明;谢康宁;闫志伟;;脉冲电磁场对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响[J];第四军医大学学报;2007年13期
6 何正华;王林;余鹏;徐明;蒋从斌;彭聚胜;夏春明;;不同组织源性细胞作为大动物骨缺损修复研究用骨组织工程种子细胞的增殖及成骨分化比较[J];武警医学院学报;2008年02期
7 李R既
本文编号：2698560
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/2698560.html
最近更新
教材专著
