褪黑激素通过SOX9介导的信号通路抑制骨肉瘤的转移和肿瘤干细胞干性的研究

发布时间：2020-06-11 09:25

【摘要】：研究目的:据报道,褪黑激素(N-乙酰基-5-甲氧基色胺)可抑制某些类型肿瘤的上皮-间质转化和癌症干细胞的干性。然而,褪黑激素对骨肉瘤的作用及其机制尚不清楚。本研究旨在研究褪黑激素对骨肉瘤进展转移及骨肉瘤干细胞的影响及其潜在机制。材料和方法:通过MTT实验,划痕实验,Transwell小室实验,蛋白质印迹实验等方法检测褪黑激素对骨肉瘤细胞侵袭和迁移的影响以及SOX9介导的信号传导通路在其中的作用。通过肿瘤干细胞成球实验和流式分析实验等技术,研究褪黑激素对骨肉瘤干细胞的抑制作用。利用小鼠皮下荷瘤及尾静脉注射等体内模型来评估褪黑激素对骨肉瘤干细胞的干性能力及对骨肉瘤肺转移的作用。研究结果:我们通过MTT实验首先确定褪黑激素不影响骨肉瘤增殖的药理最高浓度,之后通过划痕实验,Transwell试验以研究褪黑激素对骨肉瘤迁移和侵袭的影响,结果发现,实验组和对照组相比,褪黑激素可降低骨肉瘤迁移和侵袭的能力.通过CD133+标记的流式细胞技术及肿瘤成球实验,结果发现褪黑激素可抑制骨肉瘤干细胞的干性能力。同时,在褪黑激素刺激下,转录因子SOX9表达明显降低。质粒转染过表达SOX9后,再次进行划痕实验,Transwell迁移及侵袭实验,CD133+标记的流式细胞技术实验,肿瘤干细胞成球实验,接通过发现,SOX9过表达后的骨肉瘤细胞的转移及肿瘤干细胞干性能力得到了增强。在siRNA敲降SOX9后,骨肉瘤细胞的转移及干细胞干性能力被抑制。之后,对过表达SOX9的骨肉瘤细胞,予以褪黑激素刺激后,骨肉瘤的转移能力和肿瘤干细胞的干性能力被抑制至过表达前水平。以上实验结果褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤细胞的转移和肿瘤干细胞的干性能力。研究结论:研究证明褪黑激素能有效的抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的能力。此外,褪黑激素显著抑制骨肉瘤干细胞的成球效应形成并调节骨肉瘤细胞的EMT标记。体内小鼠模型显示褪黑激素显着抑制骨肉瘤的发生和转移。SOX9是介导褪黑激素作用的关键转录因子。褪黑激素通过下调骨肉瘤中SOX9介导的信号传导途径来抑制癌症干细胞。这些结果共同加深了对褪黑激素生物学功能以及抗骨肉瘤的理解,为骨肉瘤干细胞的干预提供了新的见解。
【图文】：

褪黑激素参与骨肉瘤细胞的迁移和侵袭仍然未知。我们对ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑细胞系进行ＭＴＴ测定，所述细胞系在体外用不同剂量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑时。如图１．１和图１．２所示，当褪黑激素的浓度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑时，褪黑激素均未对ＨＯＳ骨肉瘤细胞或Ｕ２骨肉瘤细胞的增值产生影响，但当褪逡逑黑激素的浓度为ＩｍＭ或更高浓度的褪黑激素可能丧失这些骨肉瘤细胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ逦＊逦＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑图１．１不同浓度的褪黑激素对骨肉瘤ＨＯＳ细胞增殖的作用逡逑２３逡逑

褪黑激素参与骨肉瘤细胞的迁移和侵袭仍然未知。我们对ＨＯＳ和Ｕ２骨肉瘤逡逑细胞系进行ＭＴＴ测定，所述细胞系在体外用不同剂量梯度的褪黑激素刺激４８小逡逑时。如图１．１和图１．２所示，当褪黑激素的浓度是Ｏ．ＯｌｍＭ，邋０．０５ｍＭ，０．１ｍＭ，邋０．５ｍＭ，逡逑时，褪黑激素均未对ＨＯＳ骨肉瘤细胞或Ｕ２骨肉瘤细胞的增值产生影响，但当褪逡逑黑激素的浓度为ＩｍＭ或更高浓度的褪黑激素可能丧失这些骨肉瘤细胞系的增殖能逡逑力。逡逑□邋ＤＭＳＯ逡逑■邋ｍｅｌａｔｏｎｉｎ逡逑１．５－，逡逑ｎ逦＊逦＊＊逡逑ｉ１０｜｜邋］｜邋ｆｌｉ邋ｉｉ邋ｎ．邋ｉ逡逑■邋１１１逡逑图１．１不同浓度的褪黑激素对骨肉瘤ＨＯＳ细胞增殖的作用逡逑２３逡逑
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R738.1

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