Micro302A、Micro498和Micro520E在兔关节软骨细胞损伤后的表达变化

发布时间：2020-06-15 15:48

【摘要】：目的:比较正常及划伤后的兔软骨细胞中的Micro302A、Micro498和Micro520E三种基因的水平变化。方法:获取三周龄兔膝关节软骨细胞作原代培养并制备细胞损伤模型。采用实时荧光定量PCR对正常软骨细胞以及受到损伤后第1、3、5、7天四个时间点的软骨细胞内三种MicroRNA表达水平进行检测。结果:成功获取兔双膝关节软骨细胞并进行原代培养后,制备了细胞损伤模型。利用实时荧光定量PCR检测分析后发现:与正常组相比,Micro302A在损伤后第1天明显升高,第3天达最高,在第5天降至接近正常组水平后继续下降,在第7天降至最低。与正常组相比,Micro498在损伤后第1天没有明显变化,然后快速上升,同样在第3天达到顶峰后缓慢下降,到第7天时达到与正常组相似水平。相较于前两个基因,Micro520E的水平变化在四个观察时间点内较稳定,变化幅度不大。呈现出第1天至第3天持续上升至最高,而后再逐步降低,到第7天略低于正常组水平的趋势。结论:在兔膝关节软骨损伤后不同的观察时间点内,Micro302A、Micro498和Micro520E都有明显不同的表达水平的变化,说明这三种MicroRNA在关节软骨损伤后的修复过程中发挥了不同的作用,为以后利用MicroRNA治疗关节软骨损伤与修复提供了一定的实验依据。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684
【图文】：

图 1 六孔板内细胞划伤示意图Fig1. Schematic diagram of scratch-wound modes in six-well节软骨细胞的收集备集正常以及划伤后 1、3、5、7 天的细胞样本。5% 酒精、100-1000ul 普通吸头（高压无菌）、移液器BS 液和 15%胎牛血清培养液（室温）、1.5ml 无菌无酶要的仪器设备有超净工作台、低温高速离心机。节软骨细胞的收集收集细胞的六孔板放置于超净工作台上，75% 酒精喷抽吸掉旧的培养液，用含双抗的无菌 PBS 液轻轻洗涤 胰蛋白酶，与传代培养步骤相同，显微镜下观察可见

图 2 取出的兔膝关节软骨Fig2. Removed rabbit articular cartilage胞原代培养培养瓶内进行兔膝关节软骨细胞的原代培养，一左右软骨细胞可贴壁达 90%（如图 3）。提前一天代细胞每次可传代至两个新瓶，新代大约五天左光学显微镜 10×）

【参考文献】

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本文编号：2714645