NGAL信号通路在猪静脉桥血管早期再狭窄中的表达及作用研究

发布时间：2020-07-01 08:07

【摘要】：目的:研究在猪静脉桥早期再狭窄模型中,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin,NGAL)信号通路的表达及其作用机制,从而探求在冠状动脉搭桥术后静脉桥血管早期再狭窄发生中NGAL信号通路的可能作用及相关机制。方法:收集猪静脉桥再狭窄模型术后7天、14天、30天共三个时间点的静脉桥标本来进行检测,并与未移植的大隐静脉进行对比,采用HE染色(hematoxylin-eosin staining),Masson染色,免疫组织化学染色等方法,观察静脉桥血管内膜增生、血管重塑和平滑肌细胞迁移的情况,然后对NGAL、MMP9(matrix metalloprotenase-9)、MMP2(matrix metalloprotenase-2)、TIMP1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1)等因子在不同桥血管中的表达变化情况进行检测。结果:通过HE与Masson染色发现,随着建模时间的推移,桥血管胶原基质逐渐降解,肌纤维增厚并向内膜迁移,血管重塑,导致桥血管的狭窄。通过免疫组化可以看出,动物模型中NGAL、MMP9、MMP2因子在正常静脉桥血管中极少表达甚至不表达。动物模型建立后第14天,NGAL开始表达在桥血管中膜层,NGAL在建模后30天在血管中膜层表达到高峰,并且在桥血管内膜层出现表达。MMP9、MMP2在建模后7天开始出现表达,表达高峰出现在建模第14天,30天后表达趋于正常水平。TIMP1在正常的静脉血管壁表达甚少,在桥血管再狭窄建立后第14天的TIMP1表达出现峰值。结论:NGAL、MMP9、MMP2、TIMP1等因子可能参与了桥血管早期再狭窄的形成,NGAL作为起始因子,致使MMP9与MMP2的表达增多,参与了平滑肌细胞向内膜的迁移以及基质的降解。TIMP1作为负性因子,对维持自身平衡可能起到了重要的负性调节作用。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R654.2
【图文】：

变化图,建模,静脉,中膜

（图 1）建模后血管壁结构变化图注：将标本切片进行 HE 染色，100 倍高倍镜下观察，细胞核呈蓝色，胶原纤维呈淡粉红色，肌纤维呈亮粉红色。NC：术前对照组静脉。马松染色时胶原纤维呈蓝绿色，胞质、肌纤维和红细胞呈红色，胞核呈蓝褐色。NC：术前对照组静脉。2. 组织学和免疫组化染色2.1 NGAL 在桥血管中的表达通过对 NAGL 进行免疫组化检测结果发现，在正常大隐静脉中，NAGL 在血管内膜、中膜和外膜三层中表达均呈阴性或弱阳性；建模 7d 与正常静脉相似，无明显表达；建模后 14d 与正常静脉相比，中膜层明显出现 NGAL 表达（P＜0.05），内膜、外膜层未见明显表达，建模后 30d 与正常静脉相比，中膜层 NGAL的表达量增加（P＜0.05），并且有向内膜层迁移的趋势，而与建模后 14d 相比，表达量增加不明显。由此可以看出，NGAL 参与到血管再狭窄的过程中，最初

图注,棕褐色,中膜,免疫组化

（图 2）NGAL 在桥血管中的表达图注：运用免疫组化，NGAL 在术前与术后 7d、14d、30d 不同时间段的表达变化，棕褐色颗粒为阳性表达。*：建模后 14d 中膜层与正常静脉 NGAL 比较表达量增加，P<0.05。**：建模后 30d 中膜层与正常静脉 NGAL 比较表达量增加，P<0.05。2.2 MMP-9、MMP-2 在桥血管中的表达通过对MMP-9、MMP-2进行免疫组化检测结果发现正常大隐静脉中MMP9几乎不表达，建模后 7d 中膜层 MMP9 开始出现阳性表达（P＜0.05），与正常大隐静脉比较，建模后 14d 中膜层阳性表达显著（P＜0.05），并且内膜层也出现阳性趋势，建模后 30 d 中膜 MMP9 表达明显减少。MMP2 也出现类似 MMP9的表达趋势，。由此可以看出，MMP9 和 MMP2 在建模后 7d 中膜层出现明显表达，在 14d 后出现表达高峰，内膜层也出现表达，此后逐渐减少，30d 时 MMP9

【参考文献】