上皮—间质转化在正常皮肤与瘢痕疙瘩角质细胞的对比研究

发布时间：2020-07-17 11:45

【摘要】：[目的]通过体外细胞培养,应用TGF-β 1诱导正常皮肤角质细胞和瘢痕疙瘩角质细胞发生上皮-间质转化,探究其对生理性和病理性角质细胞的转化作用及差异性变化,以及上皮-间质转化作用对伤口愈合和病理性瘢痕产生的可能影响作用。[方法]采集重睑成形术切下上睑皮及眼袋切除术后下睑皮、大腿刃厚皮片、耳部及腹部瘢痕疙瘩标本培养角质细胞,分别取第4～6代细胞,以终浓度为2ng/ml TGF-β1的KM(角质细胞培养基)培养角质细胞72h的作为实验组,未添加者作为阴性对照组,实验分为4个小组,两个大组:A组,正常皮肤角质细胞不加TGF-β 1的为NK组,正常皮肤角质细胞添加TGF-β 1的为NKT组;B组,瘢痕疙瘩角质细胞不加TGF-β 1的为KK组,瘢痕疙瘩角质细胞添加TGF-β 1的为KKT组;每组样本均为3例。采用细胞免疫荧光、Western-blot和Real-time PCR检测上皮-间质转化作用的相关蛋白(Occludin、N-cadherin、MMP3)和标志性基因(snail1、slug)的表达情况。应用SPSS 13.0软件进行统计分析,两样本间均数比较采用配对t检验,P0.05差异有统计学意义。[结果]A组上皮细胞标志蛋白Occludin表达减弱,由诱导前的1.42±0.18降低至诱导后的1.33±0.21(P0.05),间质细胞标志蛋白N-cadherin表达增强,由诱导前的0.57±0.08升高至诱导后的0.71±0.06(P0.05),MMP-3的mRNA表达,由诱导前的1.01±0.14升高至诱导后的1.15±0.13(P0.05),其标志性基因snail1、slug的mRNA水平表达增强,分别由诱导前的1.01±0.16、1.00±0.07升高至诱导后的 1.68±0.14、2.37±0.04;B 组,Occludin、N-cadherin,分别由诱导前的 0.97 ±0.01、1.16 ±0.08 变化至诱导后的 0.73 ±0.06、1.39 ±0.06(P0.05),MMP-3的mRNA水平表达,分别由诱导前的3.59±0.44升高至诱导后的9.28±1.89(P0.05),其标志性基因snail1、slug的mRNA水平表达情况为,分别由诱导前的4.91 ± 1.06、10.92±2.43升高为诱导后的15.3±0.06、17.35±4.38(P0.01)。免疫荧光染色和Western blot均证实了细胞Occludin蛋白表达减少,N-cadherin表达增加,符合上皮-间质转化。A组与B组比较,其上皮-间质转化的相关蛋白和基因表达量具有显著性差异(P0.01)。[结论]TGF-β1诱导的上皮-间质转化作用在瘢痕疙瘩角质细胞中效果显著,而对正常皮肤角质细胞诱导效力弱,说明TGF-β信号通路在同一细胞不同病理生理阶段发挥的主要作用效力不同或者正常皮肤角质细胞对于外界刺激具有一定的稳定性和自主调节作用;另一方面,TGF-β1诱导的上皮间质转化作用导致MMP-3表达增高,尤其是在KK组(P0.05),可能是病理性瘢痕表现出“良性肿瘤”特性的成因之一。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622
【图文】：

图４．分离表皮－真皮左皿右上部分为皮肤全邋图５．分离表皮－真皮左皿边为剥脱了表皮的逡逑层含表皮－真皮，右皿为剥脱下来的表皮逦真皮及其皮下组织，右皿为表皮逡逑２６逡逑

正常皮肤角质细胞10倍，第三代lOx

瘫痕疙瘩角质细胞io倍，第三代ioX

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本文编号：2759393