miR-200a在骨肉瘤中表达水平及临床意义

发布时间：2020-07-22 14:08

【摘要】：研究背景骨肉瘤是一种好发于儿童和青少年的原发性恶性骨肿瘤,其发病率居于原发性骨肿瘤之首,它们大多发生于四肢的长管状骨,尤其是股骨远端和胫骨近端,由于肿瘤组织生长迅速、侵袭能力强、早期转移等特点,周围正常的骨组织常常被肿瘤所侵蚀,给病人的生活带来巨大影响。近几十年以来,由于提出了新辅助化疗理念、术后放化疗治疗水平的提高再加上外科手术技术提升,过去传统的截肢术逐渐被新辅助化疗联合保肢手术所取代,骨肉瘤患者的五年生存率显著提高至60~70%,但由于骨肉瘤的高度侵袭性和早期转移以及对化疗药物耐药,加上目前暂无敏感性和特异性较高的肿瘤标志物,骨肉瘤患者在前来就诊时大多数已进入癌症晚期阶段,所以患者的肿瘤复发率和死亡率仍无明显改善。因此,迫切需要探索涉及骨肉瘤发展的潜在分子机制,以对骨肉瘤进行早期诊断及探寻新的治疗方式来改善骨肉瘤患者的预后及其生活质量。树突状细胞(dendritic cell,DC)是作为一类特定的抗原呈递细胞被大家熟知,它们在人体中分布广泛,普遍分布于血液,组织和淋巴器官中。它们被认为是免疫系统的中心,功能是桥接特异性免疫系统和非特异性免疫系统,可以产生强大的免疫应答。近十年以来,基于DC的癌症免疫疗法围绕着DC的这些功能来开展,旨在通过疫苗接种开发针对癌症的免疫治疗策略。为此,必须更好地了解DC免疫生物学,调节先天免疫系统和适应性免疫系统以及肿瘤微环境,以及应用科学的最新进展,以提高其巨大的抗肿瘤免疫治疗潜力。微小RNA是一类长度约为19~25个核苷酸片段具有调节功能的非编码RNA分子。miRNA通过与靶mRNAs的3'非翻译区(UTR)碱基互补配对诱导信使RNA(mRNA)降解或通过与种子序列不完全碱基配对抑制mRNA翻译来调节靶基因的表达。在人类癌症中观察到miRNA的异常表达,并且已经显示其参与多种关键的细胞过程,包括细胞分化,增殖和代谢。DC由发育和功能不同的亚群组成,已经发现不同DC族的发育受不同细胞因子和转录因子的网络调节。此外,DC的反应受到严格调控以维持免疫系统的稳态。在免疫系统中,miRNA在造血发育和细胞亚群分化过程中在检查点起作用,它们调节效应细胞功能,并牵涉维持动态平衡。DCs受miRNA的调控,在过去的十年中,miRNA在调节DC发育和功能中的作用已经取得了很大进展。基于骨肉瘤的治疗现状,以树突状细胞为基础的免疫治疗可以作为一种非常有前景的治疗方式来开展。目的本研究通过比较miRNA-200a在骨肉瘤组织与癌旁组织、骨肉瘤患者及健康体检者外周血、骨肉瘤细胞系及正常成骨细胞中的表达水平差异,并分析其与临床病例参数的关系,为以树突状细胞为基础的骨肉瘤的免疫治疗提供一定的理论基础。方法选取郑州大学第一附属医院骨科及小儿外科2015年10月至2017年10月收治行骨肉瘤切除手术、病理诊断明确的40例骨肉瘤患者,征得骨肉瘤患者及家属同意,所有纳入研究的骨肉瘤患者均需排除骨肉瘤以外其他系统肿瘤。收集这些患者手术当日的外周静脉血5ml、术中收集癌组织、癌旁组织及癌旁未被侵犯的组织,其中男20例,女20例,年龄介于10~48岁之间,新鲜手术标本切除后用生理盐水冲洗干净并迅速保存于-80℃低温冰箱中待用。另外收集患者临床资料,如肿瘤大小、肿瘤浸润情况、淋巴结有无转移以及其他脏器有无转移等,同时收集我院至门诊体检的40例健康人血液标本5ml放置于-80℃低温冰箱中保存待用。培养人U2OS骨肉瘤细胞系和人hFOB1.19成骨细胞系,通过qRT-PCR检测miRNA-200a在标本和细胞中的表达水平的不同,并分析它们与患者临床资料的关系。结果1.检测miRNA-200a在骨肉瘤患者癌组织及骨肉瘤细胞系中的表达水平运用qRT-PCR实验方法检测骨肉瘤患者癌组织及癌旁组织、人骨肉瘤细胞系U2OS与人成骨细胞系hFOB1.19中miRNA-200a的表达水平,结果显示癌组织中mi RNA-200a表达量低于癌旁组织,两组差异比较具有统计学意义(P0.05),骨肉瘤细胞中miRNA-200a表达量低于人成骨细胞,两组差异比较具有统计学意义(P0.05),这意味着mi RNA-200a在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系中低表达。另外通过对比不同性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤生长位置、病理类型、有无转移及不同生存情况等组间骨肉瘤组织mi RNA-200a表达水平的差异,结果显示死亡组和转移组miRNA-200a表达水平高于存活组和非转移组(P0.05),提示miRNA-200a可能在骨肉瘤发生、发展、转移和患者生存中发挥重要的作用。2.检测miRNA-200a在骨肉瘤患者外周血中的表达水平运用qRT-PCR实验方法比较40例骨肉瘤患者与40例门诊体检的健康人血清当中miRNA-200a表达水平。结果显示相对于门诊体检的健康人,骨肉瘤患者血清中miRNA-200a表达量升高,两组数据对比结果显示差异有统计学意义(P0.05)。结论miRNA-200a在骨肉瘤患者癌组织表达下调,在其血清中表达上调,表明它可能在骨肉瘤发生、发展、转移和患者生存中发挥重要的作用,可为以树突状细胞为基础的骨肉瘤的免疫治疗提供一定的理论基础。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R738.1
【图文】：

骨肉瘤,表达水平,检测比较

实验结果实验结果A-200a 在骨肉瘤组织及癌旁组织中的表达水平中通过运用 qRT-PCR 法检测比较了 40 例骨肉瘤患者骨肉瘤中 miRNA-200a 表达量。观察 miRNA-200a 在骨肉瘤组织中显示骨肉瘤组织 miRNA-200a 的表达水平低于癌旁组织，两组计学意义（P=0.0462 <0.05），结果如图 1.1 所示。miRNA中的表达水平低于癌旁组织，这意味着 miRNA-200a 可能在骨发展起作用。

骨肉瘤,表达水平,检测比较,统计学意义

图 1.2 人 U2OS 骨肉瘤细胞系与人成骨细胞系 hFOB1.19 中miRNA-200a 相对表达量-200a 在骨肉瘤患者血清与正常体检患者血清中表达水-PCR 法检测比较了 40 例骨肉瘤患者血清与 40 例门诊健康体检NA-200a 表达量，结果如图 1.3 所示。观察 miRNA-200a 在骨的表达水平，结果显示骨肉瘤患者血清中 miRNA-200a 表达水平者血清，两组间比较差异具有统计学意义（P=0.0010<0.05），200a 在骨肉瘤患者血清中呈现高表达。

骨肉瘤,临床病例,方差检验,统计方法

1.3 骨肉瘤患者血清与正常体检患者血清中 miRNA-200a 相对表达量瘤组织中 miRNA-200a 表达与临床病理参数的关系40 例骨肉瘤患者的临床病例资料，并将他们按照性别、年龄、置、肿瘤组织类型、有无转移、生存情况进行分组，根据检0a 相对表达量采用方差检验的统计方法进行数据分析，结果见

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