NLRP3炎症小体在全身型幼年特发性关节炎发病机制中的研究
发布时间：2020-07-25 09:42
【摘要】：目的研究NLRP3炎症小体及相关炎症因子在全身型幼年特发性关节炎(systemic juvenile idiopathic arthritis,SJIA)中的作用机制。方法收集2016年3月到2017年10月在我科住院的SJIA患儿33例,以及同时期年龄、性别匹配的非炎症儿童28例。收集SJIA患儿三个时间点:治疗前[SJIA(0W)]、治疗后2周[SJIA(2W)]、治疗后8周[SJIA(8W)]以及对照组PBMC,采用QRT-PCR方法测定细胞裂解物中NLRP3 mRNA、ASCmRNA和IL-1βmRNA的转录水平;Western Blot法测定上清液和细胞裂解物中NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β等蛋白表达水平;ELISA法测定上清液中细胞因子IL-1β和IL-18的浓度,Person分析IL-1β,IL-18 和 IL-6 与 WBC、PLT、Hb、CRP 以及 ESR 的相关性。结果与对照组比较,SJIA(OW)组PBMC培养基上清液中IL-1β和IL-18的浓度明显升高,差异有统计学意义(均P0.05);PBMC细胞裂解物中NLRP3蛋白表达水平明显降低,IL-1β蛋白表达水平明显升高,而caspase-1蛋白表达水平未见明显差异;PBMC细胞裂解物中NLRP3mRNA、ASCmRNA的转录水平未见明显变化,差异无统计学意义(均P0.05)。与SJIA(OW)组比较,SJIA(2W)组PBMC培养基上清液中IL-1β和IL-18的浓度明显降低,差异有统计学意义(均P0.05);PBMC细胞裂解物中NLRP3蛋白表达水平明显升高,IL-1β蛋白表达水平明显降低,而caspase-1蛋白表达水平未见明显差异;PBMC细胞裂解物中NLRP3mRNA的转录水平差异无统计学意义(P0.05)。与SJIA(OW)组比较,SJIA(8W)组PBMC培养基上清液中IL-18的浓度明显降低,差异有统计学意义(P0.05),但IL-1β浓度差异无统计学意义(P0.05)。PBMC细胞裂解物中NLRP3蛋白表达水平未见明显变化,IL-1β蛋白表达水平明显降低,而caspase-1蛋白表达水平未见明显差异(均 P0.05)。SJIA(0W)组患儿 IL-1β 与 WBC、Hb、血小板、CRP 和 ESR的相关性分析均无统计学意义(P0.05)。IL-18和IL-6与ESR呈正相关,且具有统计学意义(r=0.787,P=0.032;r=0.362,P=0.042);IL-18 和 IL-6 与 Hb 呈负相关(r =-0.709,P0.05;r =-0.434,P=0.013)。结论SJIA(0W)组PBMC培养上清液中IL-1β和IL-18浓度明显高于对照组,而NLRP3蛋白表达明显减低;SJIA患儿治疗后IL-1β和IL-18浓度明显降低,而NLRP3蛋白表达明显升高,推测IL-1β和IL-18在SJIA炎症机制中起重要作用,但NLRP3炎症小体信号通路并不参与IL-1β和IL-18的调控,其在SJIA的作用尚有待进一步研究。外周血IL-1β和IL-18水平可能成为疾病活动的监测指标。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R726.8
【图文】：
文位于羧基端的ＰＹＤ，通过与ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３的ＰＹＤ氨基端的ＣＡＲＤ，通过ｃａｓｐａｓｅ－１的ＣＡＲＤ结构域相结布于人体的单核细胞和巨噬细胞核中，当有病原体入侵胞质中，且对炎症小体的激活起到重要的作用【９〗。但也活化过程中ＡＳＣ不是必需的，但是能够增强其活ｏ－ｃａｓｐａｓｅ－ｌ的活化形式，最早是在研究细胞调亡的过程通常以无活性的酶原形式存在，一旦被激活，能够裂解Ｉ家族细胞因子的前体，使其转化为成熟的丨Ｌ－丨、１Ｌ－１８、Ｉ疫中。（ＮＬＲＰ３炎症小体结构示意图如下）逡逑
逡逑组患儿治疗前后不同时间点外周血细胞ＪＩＡ（ＯＷ）逦ＳＪ１Ａ（２Ｗ）（１．２－１７７．７）逦２．６（１．３－５）＊．５１邋土０．３８逦２．６３±０．２１２６．８±Ｉ６３逦１９５．８±５８．４（１．８－１４４．１）逦３．７５（２」－１５．３）＊．０９邋土邋１．３２逦２．７２±０．７４６．１（１．３－１３０８．２）逦４（１－９）°ＪＩＡ患儿血清中细胞因子ＩＬ－ｉｐＳＪＩＡ（ＯＷ）血清中ＩＬ－ｉｐ浓度低，且两ａ＞ｒｓ逡逑
法检测ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ表达水平，结果显示：与对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ组）逡逑比较，ＳＪＩＡ（ＯＷ）组中ＮＬＲＰ３ｍＲＮＡ、ＡＳＣｍＲＮＡ的转录水平未见明显变化，差异逡逑无统计学意义（均Ｐ＞0．0５）（见图３．２Ａ和Ｂ），丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ的转录水平显著升逡逑高（Ｐ＜０．０５）（见图邋３．２Ｃ）。与邋ＳＪＩＡ（ＯＷ）组比较，ＳＪ［Ａ（２Ｗ）组中邋ＮＬＲＰ３邋ｍＲＮＡ逡逑的转录水平差异无统计学意义（＆０．０５）（见图３．２Ａ）。逡逑ｌｉ－ｎｉ邋４－逦＿逡逑、。丨丨，１＿丨，丨邋■丨＿逡逑ｉｌ］逡逑ＣＸ0Ｊ邋邋１邋邋＾＿＿逡逑图３．２对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ通过５００邋ｎｇ／ｍｌ邋ＬＰＳ预处理６小时，逡逑随后加入Ｔｒｉｚｏ丨试剂（１ｍｌ）裂解细胞，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ法检测ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和ＩＬ－ｌｐ逡逑ｍＲＮＡ表达水平。逡逑３．４对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ刺激后上清液中细胞逡逑因子ＩＬ－ｉｐ和１Ｌ－１８的浓度逡逑对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ经第一信号ＬＰＳ邋（５００邋ｎｇ／ｍｌ）预处理逡逑６１ｉ，之后加入第二信号ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ（１０（ｉＭ），可促
本文编号：2769658
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R726.8
【图文】：
文位于羧基端的ＰＹＤ，通过与ＮＬＲＰ１、ＮＬＲＰ３的ＰＹＤ氨基端的ＣＡＲＤ，通过ｃａｓｐａｓｅ－１的ＣＡＲＤ结构域相结布于人体的单核细胞和巨噬细胞核中，当有病原体入侵胞质中，且对炎症小体的激活起到重要的作用【９〗。但也活化过程中ＡＳＣ不是必需的，但是能够增强其活ｏ－ｃａｓｐａｓｅ－ｌ的活化形式，最早是在研究细胞调亡的过程通常以无活性的酶原形式存在，一旦被激活，能够裂解Ｉ家族细胞因子的前体，使其转化为成熟的丨Ｌ－丨、１Ｌ－１８、Ｉ疫中。（ＮＬＲＰ３炎症小体结构示意图如下）逡逑
逡逑组患儿治疗前后不同时间点外周血细胞ＪＩＡ（ＯＷ）逦ＳＪ１Ａ（２Ｗ）（１．２－１７７．７）逦２．６（１．３－５）＊．５１邋土０．３８逦２．６３±０．２１２６．８±Ｉ６３逦１９５．８±５８．４（１．８－１４４．１）逦３．７５（２」－１５．３）＊．０９邋土邋１．３２逦２．７２±０．７４６．１（１．３－１３０８．２）逦４（１－９）°ＪＩＡ患儿血清中细胞因子ＩＬ－ｉｐＳＪＩＡ（ＯＷ）血清中ＩＬ－ｉｐ浓度低，且两ａ＞ｒｓ逡逑
法检测ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ表达水平，结果显示：与对照组（ｃｏｎｔｒｏｌ组）逡逑比较，ＳＪＩＡ（ＯＷ）组中ＮＬＲＰ３ｍＲＮＡ、ＡＳＣｍＲＮＡ的转录水平未见明显变化，差异逡逑无统计学意义（均Ｐ＞0．0５）（见图３．２Ａ和Ｂ），丨Ｌ－ｌｐｍＲＮＡ的转录水平显著升逡逑高（Ｐ＜０．０５）（见图邋３．２Ｃ）。与邋ＳＪＩＡ（ＯＷ）组比较，ＳＪ［Ａ（２Ｗ）组中邋ＮＬＲＰ３邋ｍＲＮＡ逡逑的转录水平差异无统计学意义（＆０．０５）（见图３．２Ａ）。逡逑ｌｉ－ｎｉ邋４－逦＿逡逑、。丨丨，１＿丨，丨邋■丨＿逡逑ｉｌ］逡逑ＣＸ0Ｊ邋邋１邋邋＾＿＿逡逑图３．２对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ通过５００邋ｎｇ／ｍｌ邋ＬＰＳ预处理６小时，逡逑随后加入Ｔｒｉｚｏ丨试剂（１ｍｌ）裂解细胞，通过ｑＲＴ－ＰＣＲ法检测ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ和ＩＬ－ｌｐ逡逑ｍＲＮＡ表达水平。逡逑３．４对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ刺激后上清液中细胞逡逑因子ＩＬ－ｉｐ和１Ｌ－１８的浓度逡逑对照组和ＳＪＩＡ患儿不同时间点ＰＢＭＣ经第一信号ＬＰＳ邋（５００邋ｎｇ／ｍｌ）预处理逡逑６１ｉ，之后加入第二信号ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ（１０（ｉＭ），可促
本文编号：2769658
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