MiR-140在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞恶性生物学表型的影响

发布时间：2020-08-02 21:10

【摘要】：目的:检测骨肉瘤组织标本及细胞株中miRNA-140的表达情况,探讨miRNA-140对骨肉瘤细胞生物学行为包括细胞增殖、细胞凋亡和细胞侵袭的影响及其调控作用的分子机制。方法:临床上收集南昌大学第一附属医院、南昌大学第二附属医院和江西省肿瘤医院40例骨肉瘤组织标本,采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测所收集到的组织标本和骨肉瘤细胞株(U2OS)中miR-140的表达。用脂质体法将miR-140mimic(模拟物)和si-HDAC4转染至U2细胞中;实验设置为转染组、NC组和Blank组,RT-PCR检测miR-140和HDAC4核酸水平,Western blot检测HDAC4及HIF-1的蛋白水平表达;CCK-8法检测增殖,流式细胞术检测凋亡,Transwell小室检测侵袭。荧光素酶报告实验验证HDAC4是否为miR-140的靶基因。结果:40对骨肉瘤组织标本中有29例骨肉瘤组织中miR-140的表达明显低于与之其对应的瘤旁组织(P0.05)。转染miR-140组的U2细胞中miRNA-140的表达水平明显升高,HDAC4的表达下降(P0.05)。转染miR-140组的U2细胞增殖能力明显下降,凋亡率增加,侵袭能力下降(P0.05);萤光素酶验证实验结果显示HDAC4是miR-140的一个靶基因。转染si HDAC4片段后U2细胞中HDAC4的表达明显降低(P0.05)。si HDAC4后U2细胞增殖能力下降(P0.05),凋亡率增加(P0.05),侵袭力减弱(P0.05)。si-HDAC4能够明显降低HDAC4以及下游基因HIF-1的表达。结论:骨肉瘤组织中miR-140的表达降低;HDAC4是miR-140的一个靶基因,MiR-140可抑制U2细胞的恶性表型。miR-140能靶向抑制HDAC4的表达。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R738.1
【图文】：

图 1 miR-140 在骨肉瘤组织及其对应瘤旁组织的表达.*P<0.053.2 MiR-140 mimic 转染后 U2 细胞中 miRNA-140 的表达。转染 miR-140 mimics 24 小时后，通过实时荧光定量 PCR 检测各组细胞中miR-140 的表达结果如图 2 显示：转染组 miR-140 的表达量明显高于其他两组（P<0.05）。

T-PCR 检测 miR-140 mimic 转染后 U2 细胞中 miR-140 的表达. miR-140 mimic 对骨肉瘤细胞系增殖的影响 增殖实验结果显示,转染 48 h 和 72h 时，miR-140 mim较其他两组均明显下降（P＜0.05）,（图 3）。

2 RT-PCR 检测 miR-140 mimic 转染后 U2 细胞中 miR-140 的表达.*P达 miR-140 mimic 对骨肉瘤细胞系增殖的影响-8 增殖实验结果显示,转染 48 h 和 72h 时，miR-140 mimic 力较其他两组均明显下降（P＜0.05）,（图 3）。

【参考文献】

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本文编号：2779069