透明质酸通过miRNA在诱导M2样肿瘤相关巨噬细胞形成中的作用机制研究

发布时间：2020-08-03 09:35

【摘要】：目的:探讨细胞外基质透明质酸(hyaluronan,HA)对肿瘤免疫调节的作用:1、研究乳腺癌患者外周血中M2样单核细胞的表达水平;2、探讨乳腺癌患者外周血M2样单核细胞与血浆HA之间的相互关系;3、探讨中分子量HA(INT-HA)如何通过miRNA调控M2样肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)形成的机制。方法:1、应用流式细胞术检测乳腺癌患者、良性疾病患者和健康体检者外周血中CD14~+CD163~+/CD14~+CD204~+/CD14~+CD163~+CD204~+M2样单核细胞的表达水平,分析其与临床病理资料的相关性;2、通过免疫组化方法观察乳腺癌和乳腺良性疾病组织中CD204~+M2样TAMs与HA的表达情况;3、通过化学发光方法检测乳腺癌患者、良性疾病患者和健康体检者血浆中HA、CEA、CA15-3的表达水平,并分析外周血M2样单核细胞与HA之间的相关性;4、磁珠分选外周血单核细胞,采用不同分子量及不同浓度的HA处理单核细胞72 h;5、应用RT-qPCR及ELISA检测HA处理后的单核细胞中与M2样TAMs相关的标记分子的表达水平(Arg1、IL-10、CCL18、CCL22及CCR2等);6、使用miRNA芯片技术分析HA处理后的单核细胞中miRNAs的表达变化;7、通过miRNA在线软件(TargetScan,miRDB和miRWalk)分析miRNA潜在的靶基因;8、根据HA处理前后miRNA的变化,在THP-1来源的巨噬细胞中转染相应的miRNA mimics或inhibitors,分析miRNA对于M2样TAMs的调节机制;9、通过RT-qPCR及Western blot验证miRNA的靶基因;10、收集实体瘤患者外周血单核细胞及相应血浆,使用RT-qPCR检测单核细胞中的IL-10、CCL18、miRNA及其相应靶基因的表达水平,应用化学发光法检测血浆中HA水平,分析这些指标之间的相互关系。结果:1、相对于良性疾病患者和健康体检者,乳腺癌患者外周血中CD14~+CD204~+M2样单核细胞明显升高;2、外周血CD14~+CD204~+M2样单核细胞水平对于乳腺癌诊断的敏感度和特异性优于CEA和CA15-3;3、CD204~+M2样TAMs与HA在乳腺癌组织中的表达明显高于乳腺良性疾病组织;4、CD14~+CD204~+M2样单核细胞与HA联合可提高乳腺癌的诊断敏感性和特异性;5、CD14~+CD204~+M2样单核细胞与TNM肿瘤分级、淋巴结转移、组织学分化之间存在明显相关性;6、相对于LMW-HA与HMW-HA,INT-HA刺激单核细胞发生M2样极化的效果最为显著;7、INT-HA主要通过TLR4引起巨噬细胞发生M2样极化;8、通过miRNA microarray分析INT-HA刺激与未刺激两组之间miRNA表达谱的变化,证实miR-935的表达降低最为明显;9、miR-935表达降低是通过INT-HA作用于巨噬细胞上TLR4引起的;10、miR-935在INT-HA引起的M2样巨噬细胞极化中发挥重要的调控作用;11、MiR-935可能通过作用靶基因C/EBPβ发挥调控M2样巨噬细胞极化的作用。结论:1、乳腺癌患者外周血中CD14~+CD204~+M2样单核细胞与血浆HA存在明显正相关,可联合辅助诊断乳腺癌。2、INT-HA能够引起巨噬细胞发生M2样极化;3、INT-HA引起巨噬细胞发生M2样极化可能通过TLR4-miR-935-C/EBPβ途径发挥作用,该途径可能成为一个新药物的治疗靶点。
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9
【图文】：

经统计学分析发现分别显著高于健康对照组(37.66 2.22,6.53 2.48 和 2.45 1.05) 和良性疾病组 (38.54 2.44, 7.49 2.63 和 2.90 1.23) (图2B-D)。 然而，健康对照组与良性对照组外周血中 M2 样单核细胞之间并无统计学差异。因此，外周血循环中 CD14+CD163+/CD14+CD204+/CD14+CD163+CD204+M2 样 单核细胞在乳腺癌患者中特异性升高，提示其具有潜在的临床辅助诊断

上海交通大学 2015 级博士研究生学位论文对照组、乳腺良性患者组、乳腺癌组外周血 CD14+CD204+M2 样单核细胞特征 Characterization of circulating CD14+CD204+M2-like monocytes in healthy cobenign patients, and breast cancer patients.示的中间细胞群以单核细胞细胞为主，以中间细胞群设门得到 CD14+的以 CD14+的单核细胞设门得到 CD204+M2 样单核细胞，并计算出 CD14+细胞所占百分比。

上海交通大学 2015 级博士研究生学位论文 样单核细胞与血浆 HA 在乳腺癌患者中表达水平此，我们使用 Spearman 相关分析来分析对照组性(Table3)。结果发现外周血 CD14+CD204+M2组中存在相关性 (Spearmanr=0.404,p<0.05)(图与 CEA/CA15-3 之间，CD14+CD204+M2 样单核细-3 与 CEA 之间在本部分研究中均不存在相关性。

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本文编号：2779441