A型肉毒毒素对皮肤扩张速度及扩张皮瓣成活率影响的初步研究

发布时间：2020-08-06 07:20

【摘要】：目前皮肤软组织扩张术在整形外科领域临床上已获广泛应用,其主要通过在皮下置入扩张囊并定期向囊内注水使扩张区域的皮肤在扩张囊的机械压力下不断产生与邻近组织颜色、质地等类似的“额外”皮肤用于组织缺损的修复。但其目前仍然存在诸多不足,如扩张周期长、组织新生慢、扩张过快容易造成皮瓣血运障碍、皮瓣即时回缩率高影响皮瓣修复效果等,并且扩张皮瓣成活的长宽比极限值有时仍不能满足修复要求,如何进行安全、有效、快速的皮肤扩张一直是人们关注的重点问题,也是当前基础和临床重要的研究方向。本文第一部分利用大鼠背部皮肤扩张模型进行皮肤扩张,比较A型肉毒毒素组与对照组扩张速度、扩张过程中皮肤血运、扩张皮瓣即时回缩率的差异,并通过测量扩张皮肤表皮、真皮及包膜厚度,结合Masson染色、α-SMA免疫组织化学染色、CD34免疫组织化学染色结果等对两组扩张速度、即时回缩率差异原因及扩张过程中扩张皮肤血运的安全性进行探讨,旨在探索安全、有效地加快皮肤扩张的新方法;本文第二部分利用第一部分的方法扩张出的皮肤形成一定长宽比例的扩张皮瓣,观察记录术后每日皮瓣血运情况及术后7天时皮瓣的成活率,同时结合皮瓣末端组织的HE染色结果来探讨在A型肉毒毒素干预下扩张出的皮肤用于创面修复的安全性和可靠性。第一部分应用大鼠背部皮肤扩张模型探索A型肉毒毒素对皮肤扩张速度的影响目的:通过A型肉毒毒素干预大鼠背部皮肤的扩张过程,观察A型肉毒毒素对大鼠皮肤扩张速度、血运、即时回缩率及组织学的影响,总结A型肉毒毒素对皮肤扩张的作用。方法:将18只SD大鼠随机分为实验组及对照组,按拟埋置扩张器大小于大鼠背部文身并于文身区域皮内注射A型肉毒毒素或生理盐水,然后埋置扩张器,术后1周开始注水,每周2次,每次注水至囊内压8Kpa,记录扩张容量、皮肤血运情况并定期测量文身区域面积,扩张4周后取材测量扩张皮肤回缩率,HE染色观察表皮、真皮、纤维包膜厚度,Masson染色观察纤维包膜胶原蛋白沉积情况,α-SMA免疫组织化学染色评估纤维包膜内肌成纤维细胞含量,CD34免疫组织化学染色观察扩张皮肤内血管直径及密度,在光学显微镜下观察并拍照,用Image Pro Plus、Image J软件进行测量,SPSS 13.0软件进行统计分析。结果:自第一次注水至扩张结束,与对照组比较,A型肉毒毒素组扩张容量、文身区域面积更大,扩张皮肤血运更好,扩张4周后,A型肉毒毒素组皮肤纤维包膜薄,即时回缩率低,肌成纤维细胞含量少,皮肤血管管径大、密度高,A型肉毒毒素组纤维包膜内胶原纤维较稀疏,排列散乱,对照组纤维包膜内胶原纤维排列较为致密、规则,两组扩张皮肤表皮及真皮厚度未见显著差异。结论:A型肉毒毒素能增加皮肤扩张容量,提高皮肤扩张速度,降低扩张皮肤即时回缩率,这可能与其抑制纤维包膜形成、减少包膜中胶原蛋白的沉积及成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有关,A型肉毒毒素对扩张过程中皮肤的血运有保护作用,可能与A型肉毒毒素扩张皮肤内血管并促进血管生成有关。第二部分A型肉毒毒素对扩张的任意皮瓣血运及成活率的影响目的:利用第一部分的方法扩张大鼠背部皮肤后,分别形成一定长度及宽度的皮瓣并转移缝合,观察两组皮瓣的血运及成活情况,比较A型肉毒毒素干预组与对照组扩张皮瓣成活率的差异。方法:解剖大鼠背部皮肤,将皮肤自肌层浅面掀起,观察大鼠背部皮肤血管分布情况,为扩张后形成任意皮瓣提供解剖支持,按第一部分的方法扩张大鼠背部皮肤,在扩张4周末利用扩张后的皮肤形成一蒂在尾侧的任意皮瓣,每日以组织血流灌注成像评价系统测量皮瓣血运并拍照记录皮瓣成活情况,利用Image J软件测量术后第7天皮瓣成活率,并于术后第7天取材行HE染色观察皮瓣末端炎症细胞浸润及组织坏死情况。结果:A型肉毒毒素组自皮瓣转移术后即刻至术后7天皮瓣血运均较好于对照组,术后7天皮瓣成活率较对照组高,HE染色显示皮瓣主要为表皮坏死,肿胀程度较轻,层次结构较清晰,炎症细胞浸润程度轻,对照组皮瓣肿胀明显,皮肤结构崩解严重,层次不清,大量炎症细胞浸润。结论:A型肉毒毒素改善了扩张皮瓣转移术后的皮瓣血运,提高了皮瓣成活率。
【学位授予单位】：中国人民解放军空军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R622
【图文】：

植入物,宿主,异物反应,对植

图 1.宿主对植入物的反应 A，在植入物与宿主体液接触的一刻异物反应即已开始；B，伴随着细胞碎片和血小板聚集的产生，宿主蛋白在植入物表面出现自发的吸收；C，血小板因子识别蛋白覆盖的植入物表面，刺激中性粒细胞巨噬细胞向该处梯度浸润，这些细胞产生活性氧、酶、细胞因子和趋化因子；C 和 D，随后的几天是中性粒细胞对植入区的巨噬细胞和未分化单核细胞的募集，此过程与中性粒细胞的退出同时进行；D，巨噬细胞释放信号分子吸引成纤维细胞与肌成纤维细胞，成纤维细胞及肌成纤维细胞分泌胶原蛋白包裹植入物，且肌成纤维细胞能收缩并对植入物产生压力。[68]六.A 型肉毒毒素对血管及皮瓣血运的作用血管的舒缩由神经因素及体液因素共同调节，其中神经因素占主要地位，且交感缩血管神经纤维在血管的神经支配中占据优势地位，甚至在绝大多数血管中交感缩血管神经纤维是唯一的支配神经，血管平滑肌交感性收缩是由节后纤维末梢释放

相邻点,背部,大鼠,间距

于文身区域内每间隔约2cm设计一注射点，共计两排8个点(图2)，将 A 型肉毒毒素以生理盐水配制稀释(100u BTX-A+20ml 生理盐水配制成 5u/ml溶液)，再次将大鼠背部消毒后，BTX-A 组每点注射 1u（0.2ml）A 型肉毒毒素，对照组每点注射等量生理盐水，注射层次均位于皮内。图 2 大鼠背部文身区域注射点设计，相邻点间距 2cm2.3 手术过程及术后处理1) 消毒铺单后，于大鼠项部垂直于脊柱方向设计约 2cm 扩张器埋置切口，切口深达肌层浅面，在该层次以剥离剪向大鼠尾侧剥离，剥离范围以文身区域为界，然后自切口向大鼠头侧剥离出适当腔隙用以放置内置注射壶，剥离完成后，以拧干的生理盐水纱布填塞腔隙压迫止血，约 5 分钟后取出；2) 观察术区无活动性出血后，检查扩张器有无漏气、不张等情况，抽出扩张器内气体，将扩张器折叠后置入剥离腔隙，注射壶置于头侧剥离腔隙内，于切口部位基底缝合 1 针固定导水管

区域图,埋置,箭头,手术切口

图 3 扩张器埋置术后即刻，红色箭头所示为内置注射壶，黄色箭头所示为手术切口，蓝色箭头所示为扩张囊埋置区域d 将两组大鼠取出，腹腔麻醉、脱毛后，室温下静置约 15 分钟，将区域分为前中后三部分，分别以激光多普勒血流监测仪测量文身区分中央部位皮肤血运情况并记录，每点重复测量 5 次，取其平均值血运情况（图 4a-4c）；

【参考文献】