水通道蛋白角度探讨Celebrex对骨关节炎软骨细胞损伤的保护机制研究

发布时间：2020-08-10 06:11

【摘要】：目的:骨关节炎是常见的退行性疾病,是软骨细胞、软骨基质、软骨下骨三者降解与合成偶联失衡的结果,软骨细胞功能变化在软骨基质降解过程中起着重要的作用,维持软骨细胞功能稳定则是重要因素。建立膝骨关节炎模型,观察软骨水肿与AQP1、AQP3分布与含量的关系,从水通道蛋白(AQPs)与软骨细胞损伤的角度出发,探讨西乐葆对骨关节炎抗炎消肿的作用机制。方法:1.动物实验:2月龄雄性SD大鼠,随机分3组:空白对照组、关节炎模型组、西乐葆组,每组15只,木瓜蛋白酶关节腔内注射制备OA模型,模型建立后西乐葆组给予17.85mg/(kg.d)灌胃,空白对照组、关节炎模型组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,共4周,取血清ELISA检测IL-1β含量,取左侧膝关节HE染色观察软骨病理改变、甲苯胺蓝染色观察基质蛋白多糖变化、免疫组织化学观察AQP1、AQP3表达变化,刮取右侧膝关节软骨Real-time PCR、Western Blot检测AQP1、AQP3 mRNA和蛋白表达变化。2.细胞实验:培养SW1353人软骨肉瘤细胞,甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫细胞化学观察细胞形态,分3组:阴性对照组、IL-1β处理组、IL-llp+Celebrex处理组,CCK8检测细胞存活率,采用IL-lβ干预细胞24h、48h,分别收集细胞,Real-time PCR、Western Blot 检测 AQP1、AQP3、VEGF 表达变化。结果:1.SD大鼠造模后4周血清IL-1β含量增加(P0.01),软骨面可见缺损,缺损下方部分软骨陷窝内未见细胞核,软骨基质染色不均且淡染,基质蛋白多糖含量减少(P＜0.01),移行层、放射层软骨细胞AQP1、AQP3表达增强(P0.01),AQP1、AQP3mRNA和蛋白表达均上调,具统计学意义。西乐葆组血清IL-lβ含量降低(P0.05),改善软骨损伤程度,基质染色较均匀,减缓蛋白多糖丢失(P＜0.01),下调移行层、放射层软骨细胞AQP3表达(P0.01),降低AQP3 mRNA和蛋白表达(P0.01),AQP1表达变化不显著。2.体外培养SW1353细胞甲苯胺蓝染色为蓝紫色,细胞质II型胶原表达阳性,采用IL-1β处理细胞,AQP1、AQP3、VEGF mRNA 和蛋白表达均上调(P0.01)(P0.01)(P0.05),IL-1β+Celebrex处理组AQP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01),24hAQP1 mRNA、48hAQPl表达略下调(P0.05),VEGFmRNA和蛋白变化不显著。结论:1.AQP1、AQP3在膝关节炎软骨组织水肿中,特别是水的转运过程起重要作用。2.西乐葆可抑制炎症因子表达,下调AQP1、AQP3表达量,减缓软骨基质蛋白多糖丢失,稳定软骨细胞,改善软骨基质病变。3.IL-1β干预SW1353细胞异常表达AQP1、AQP3,西乐葆可下调AQP1、AQP3表达以保持细胞存活率。
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R684.3
【图文】：

细胞囊呈强嗜碱性，钙化层细胞体积较小、核质比增大；放射层与钙化层交接逡逑处称为潮线，钙化层与软骨下骨交接处称为粘合线；ＨＥ染色显示软骨４层结构逡逑清晰，基质染色均匀，未能良好显示潮线（图２－１Ａ）。逡逑关节炎模型组软骨面可见缺损，缺损达移行层、部分可至放射层，缺损下逡逑方部分软骨陷窝内未见细胞核，移行层、放射层细胞体积增大，数量减少，排逡逑列较规则、未见明显紊乱，细胞囊、软骨基质未见明显苏木素着色，钙化层细逡逑胞体积增大，基质染色不均Ｃ图２－１Ｂ）。与模型组相比，Ｃｅｌｅｂｒｅｘ组软骨面较光逡逑滑，未见明显缺损，移行层、放射层细胞数量稍多，排列较规则，钙化层细胞逡逑体积略小，基质染色较均匀，表明Ｃｅｌｅｂｒｅｘ对０Ａ软骨结构具一定保护作用（图逡逑２－１Ｃ）。逡逑ＮＣ逦ＯＡ逦Ｃｅｌｅｂｒｅｘ逡逑图２－１软骨显微结构（ＨＥ染色、ｘ２00）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｔｈｅ邋ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｘ２００）逡逑２．４．２软骨基质蛋白多糖表达变化逡逑甲苯胺蓝属醌亚胺染料，是常用的人工碱性染料，可与组织中的酸性物质逡逑结合而染色

￣Ｉ丨ＨＩ丨川丨ＩＩ逡逑ｃ／逡逑图２－３软骨基质蛋白多糖含量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ逡逑注：＊为与ＮＣ相比，Ｐ＜０．０５；邋＊＊为与ＮＣ相比，Ｐ＜０．０１。逡逑＃为与0Ａ相比，尸＜０．０５；邋＃＃为与ＯＡ相比，尸＜０．０１。逡逑Ｆ＝１８９．７２９邋尸＝０．０００逡逑每个样本随机选取相同倍数下５个不同视野，ＨＥ染色结合甲苯胺蓝染色结逡逑果作Ｍａｎｋｉｎ评分Ｗ邋（表２－１０），对病程分期：０－４分为Ｉ期，５－８分为ＩＩ期，９－１１逡逑分为ＩＩＩ期，１２－１４分为ＩＶ期。逡逑２６逡逑

逦ＯＡ逦Ｃｅｌｅｂｒｅｘ逡逑图２－２软骨基质蛋白多糖（甲苯胺蓝染色、ｘ２00）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ邋（Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ邋ｂｌｕｅ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ邋ｘ２００）逡逑８－逡逑＊＊逡逑６－逦Ｔ邋７逡逑Ｉ邋．逦ｒｒＺＬｒｒ，逡逑ｉ邋４＇逦＝＾＝逡逑ｓ逦—逡逑２－逡逑￣１￣逡逑0＜邋ｉ，ｉ￣ｒ－逦￣Ｉ丨ＨＩ丨川丨ＩＩ逡逑ｃ／逡逑图２－３软骨基质蛋白多糖含量逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｃａｒｔｉｌａｇｅ邋ｍａｔｒｉｘ逡逑注：＊为与ＮＣ相比，Ｐ＜０．０５；邋＊＊为与ＮＣ相比，Ｐ＜０．０１。逡逑＃为与0Ａ相比，尸＜０．０５；邋＃＃为与ＯＡ相比，尸＜０．０１。逡逑Ｆ＝１８９．７２９邋尸＝０．０００逡逑每个样本随机选取相同倍数下５个不同视野，ＨＥ染色结合甲苯胺蓝染色结逡逑果作Ｍａｎｋｉｎ评分Ｗ邋（表２－１０），对病程分期：０－４分为Ｉ期，５－８分为ＩＩ期，９－１１逡逑分为ＩＩＩ期，１２－１４分为ＩＶ期。逡逑２６逡逑

【参考文献】

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本文编号：2787687