沉默RRS1基因对乳腺癌BT549细胞系功能的影响及作用

发布时间：2020-08-15 11:33

【摘要】：目的:乳腺癌是常见的女性恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年增加的趋势,并且趋于年轻化方向发展,乳腺癌严重的威胁着女性身体健康。三阴性乳腺癌(Triplenegative breast cancer,TNBC)是一类雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(Her-2)均是阴性的一类特殊类型的乳腺癌。据报道,全世界每年约有100万新发乳腺癌病例,其中有接近170,000(12-20%)例患者属于TNBC表型。与其他类型的乳腺癌相比较,TNBC最常见于年轻女性,临床上其侵袭程度更高,预后疗效更差。虽然TNBC对化疗较为敏感,但易发生早期转移,且对于内分泌和Her-2靶向治疗无效。由于疾病本身具有异质性以及TNBC分子表达特征的复杂性,使得TNBC缺乏相应的靶向治疗。乳腺癌BT549细胞属于三阴性乳腺癌细胞系,采用慢病毒介导的RNA干扰技术敲减乳腺癌BT549细胞系中RRS1基因的表达量,并观察核糖体合成调控因子1(Regulator of ribosome synthesis 1,RRS1)基因表达量的降低对BT549细胞的功能影响及分子机制的研究。方法:(1)体外培养人乳腺癌BT549细胞和正常乳腺细胞HMEC,采用实时荧光定量PCR(q PCR)及Western Blotting(WB)法检测乳腺癌BT549细胞及正常乳腺细胞HMEC中RRS1在m RNA及蛋白水平的表达量。(2)采用慢病毒感染BT549细胞,敲减RRS1基因的表达量,并使用q PCR和WB法检测RRS1基因的敲减效率。(3)采用MTT法检测细胞的增殖活力;DAPI染色、Caspase3,7、FCM法检测BT549细胞RRS1基因敲减后凋亡水平的变化;Transwell和侵袭法检测RRS1基因敲减后BT549细胞的侵袭转移能力,并采用WB法检测RRS1基因敲减后对BT549细胞凋亡相关蛋白的影响。结果:(1)乳腺癌BT549细胞中RRS1基因m RNA及蛋白的表达水平均高于正常乳腺HMEC细胞(P0.01)。(2)RRS1-sh RNA转入BT549细胞后,RRS1基因m RNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P0.01)。(3)RRS1基因被敲减后经MTT检测其细胞活力明显下降(P0.01);细胞周期被阻滞在G2期(P0.01),细胞凋亡小体明显增加(P0.01),Caspase3发光强度明显提高(P0.01),细胞早期凋亡明显增多(P0.05);侵袭转移能力降低(P0.05);与凋亡相关的蛋白p53明显升高(P0.01),MDM2表达明显降低(P0.05),凋亡蛋白bax表达量明显提高(P0.01),且致癌蛋白bcl-2表达量明显降低(P0.05)。结论:RRS1基因在BT549乳腺癌细胞中高表达,采用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默RRS1基因后,乳腺癌细胞BT549的增殖、迁移及侵袭能力明显降低,凋亡水平明显升高。RRS1作为一个新发现的乳腺癌相关基因,与乳腺癌的增殖、凋亡、迁移侵袭功能相关。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.9

【参考文献】

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本文编号：2794056