miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株生物学行为的影响及作用机制研究

发布时间：2020-09-07 09:48

　　目的:明确miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株生物学行为的影响及相关作用机制。方法:CCK-8实验检测miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株增殖的影响;Transwell实验检测miR-30d对尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-30d对尤文肉瘤细胞SK-ES-1迁徙能力的影响;使用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察mi R-30d过表达时人尤文肉瘤SK-ES-1细胞形态的变化;流式细胞技术检测miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株凋亡的影响;Western blot检测miR-30d过表达时人尤文肉瘤SK-ES-1细胞中侵袭、迁徙相关蛋白MMP-2和MMP-9以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和PARP的表达情况。结果:CCK-8实验结果显示,miR-30d过表达可显著抑制人尤文肉瘤细胞株SK-ES-1的增殖;Transwell实验结果显示miR-30d过表达可显著抑制尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭能力;划痕实验检测发现miR-30d显著抑制尤文肉瘤SK-ES-1细胞的迁徙能力;Hoechst 33258染色于荧光倒置显微镜下观察发现miR-30d过表达组(miR-30d模拟物组)中人尤文肉瘤SK-ES-1细胞内出现了典型的细胞凋亡形态变化,包括染色质浓缩、核膜裂解、细胞核裂解等;流式细胞术实验结果发现mi R-30d可提高人尤文肉瘤SK-ES-1细胞的凋亡率;Western blot实验发现miR-30d过表达使恶性表型相关蛋白MMP-2和MMP-9表达量降低;Western blot实验结果显示miR-30d过表达使人尤文肉瘤SK-ES-1细胞内促凋亡蛋白Bax的表达量提高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量降低,因此Bax与Bcl-2的表达量(Bax/Bcl-2)比值升高,细胞凋亡过程中的重要执行蛋白caspase-3以及细胞凋亡底物PARP表达量降低,提示caspase-3出现显著的剪切活化,而PARP被剪切降解。结论:1.miR-30d可诱导人尤文肉瘤细胞株SK-ES-1凋亡并抑制细胞增殖。2.miR-30d可抑制人尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭和迁徙能力。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R738
【部分图文】：

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第 3 章实验结果第 3 章实验结果miR-30d 过表达可抑制人尤文肉瘤 SK-ES-1 细胞的增殖CCK-8 实验结果显示，与 Scramble 组相比，上调 miR-30d 表达的实验S-1 细胞在不同的时间点（24 h、48 h 和 72 h）活力均显著下降（p<0cramble 组同空白对照组相比差异无统计学意义（p>0.05），这个结果30d 能够抑制人尤文肉瘤细胞 SK-ES-1 的生长，发挥抑癌基因的作用

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19图 2：Transwell 实验检测 SK-ES-1 细胞的侵袭能力瘤细胞 SK-ES-1 经 Transwell 实验拍摄的典型图像。（B）上中 miR-30d 表达后，尤文肉瘤细胞 SK-ES-1 的侵袭能力受到了mble 组比较，***p<0.001）

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第 3 章实验结果3.3 miR-30d 过表达可抑制人尤文肉瘤 SK-ES-1 细胞的迁徙能力本研究使用划痕实验检测 miR-30d 对人尤文肉瘤 SK-ES-1 细胞迁徙的影响。实验结果显示：过表达 miR-30d 的 miR-30d mimics 组细胞与 Scramble 组相比，尤文肉瘤 SK-ES-1 细胞的迁徙能力显著下降（p<0.001），而 Scramble 同空白对照组相比差异无统计学意义（p>0.05）。实验结果说明 miR-30d 能够抑制人尤文肉瘤细胞 SK-ES-1 的迁徙能力。A

【参考文献】