巨噬细胞极化与鞘脂代谢对肝切除术后炎性反应及肝再生的作用及机制研究

发布时间：2020-09-25 07:33

　　背景和目的目前,肝切除术后肝功能不全(post-hepatectomy liver dysfunction,PLD)依然是影响患者围手术期恢复及诱发术后肝功能衰竭(post-hepatectomy liver failure,PHFL)甚至死亡的主要原因,其病理生理机制仍未完全阐明。研究发现肝切除术后过度活跃的炎性反应是诱发PLD甚至PHLF的重要因素。大量文献表明过度的炎性反应可抑制肝再生(liver regeneration)过程,适度的炎症反应可促进肝再生。巨噬细胞是机体固有免疫中重要组成部分,在协调炎症发展过程发挥重要作用,可分两种极化类型:经典活化型(classically activated macrophages,CAMs)和选择性活化型(alternatively activated macrophages,AAMs),即M1型和M2型。目前研究认为,M1型可以通过分泌多种促炎因子,促进炎症的发生发展;M2型则可以通过分泌多种抗炎因子抑制炎症反应。鞘脂组学中鞘脂类物质神经酰胺(ceramide,CER)及其代谢产物与细胞增殖、凋亡及炎症反应关系密切密切。本课题将围绕巨噬细胞极化情况影响肝切除术后肝组织炎症反应及肝再生的作用及与鞘脂代谢的相关性展开研究,旨在为进一步研究术后肝功能不全发生发展的病理生理机制,以及为术后肝功能不全的精准防治提供新的指导思路。研究内容和方法:1.建立小鼠骨髓来源的M1/M2极化巨噬细胞模型;2.建立小鼠肝切除后M1/M2极化巨噬细胞肝内移植模型;3.研究巨噬细胞极化对肝切除术后炎性反应调控及对肝再生的调节作用;4.建立鞘脂的定性定量分析方法,探讨鞘脂代谢与巨噬细胞极化及肝再生的相关性。结果:1.成功建立小鼠骨髓来源的M1/M2极化巨噬细胞模型;2.成功建立小鼠肝切除并M1/M2极化巨噬细胞肝内移植模型;3.巨噬细胞极化对术后肝炎性反应及肝再生的调节作用:我们研究发现小鼠肝切除并门静脉输注M2型巨噬细胞可减轻术后早期的肝脏炎症反应,并且可以促进肝再生,而M1型则相反;4.成功建立鞘脂的定性定量分析方法,初步发现鞘脂代谢与巨噬细胞极化及肝再生之间存在相关性。结论:通过本研究,我们发现巨噬细胞不同极化类型对小鼠肝切除术后肝脏炎性微环境的发生发展及肝再生的进程存在着明显的调控作用,改变肝脏巨噬细胞极化情况可影响肝切除术后肝脏的炎性反应及肝再生的发生发展:巨噬细胞的M2向极化可以明显抑制肝切除术后早期的肝组织炎症反应,并对肝再生有促进作用,而M1向极化则有着相反的作用。成功建立鞘脂定性定量分析方法并初步发现鞘脂代谢与巨噬细胞极化及肝再生之间存在相关性。综上,这些研究对进一步研究肝切除术后肝功能不全甚至肝功能衰竭的病理病生机制及防治提供实验思路与方法。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R657.3
【部分图文】：

功能图,鞘脂,生物活性,功能

逑要亚结构，目前越来越多的研宄己表明鞘脂密切参与细胞的增殖、凋亡等生命逡逑活动并与多种疾病相关（如图１－２），为鞘脂代谢在各种疾病的生理病理学研究逡逑提供重要的理论依据［３８］。逡逑Ｉｎｄｕｃｅｒｓ邋ＵＶ邋ｒａｄｉａｔｉｏｎ逦Ｈｅａｔ邋ｓｔｒｅｓｓ逦Ｇｒｏｗｔｈ邋ｆａｃｔｏｒｓ邋（ＰＤＧＦ，邋ＩＧＦ．邋ＶＥＧＦ）逡逑Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ逦ＵＶ邋ｒａｄｉａｔｉｏｎ逦Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ邋（ＴＮＦ．邋ＩＬ－１）逡逑Ｄｅａｔｈ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ逦Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ逦Ｈｙｐｏｘｉａ逡逑逦１邋Ｄｅａｔｈ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ邋Ｆｃ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ逡逑逦邋ｏｘＬＤＬ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ逡逑ＳＰＴ逡逑Ｃｅｒａｍｉｄｅ逡逑ｓｙｎｔｈａｓｅ逡逑ｗ逦ｗ逦”逡逑Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ逦＾逦？邋Ｃｅｒａｍｉｄｅ邋ＣＤａｓｅ邋＾邋Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ逦＿＿—＿Ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ逡逑（３０，０００）逦（３

形态图,转染,质粒,巨噬细胞

获取骨髓细胞加入含有Ｌ９２９细胞培养上清的ＢＭＤＭ培养基后，于光镜下逡逑观察细胞形态变化。培养第３天，可见骨髓中单？核细胞部分己成功向巨噻细胞逡逑分化（如图２－丨）；培养第４天，巨噬细胞标志物Ｆ４／８０荧光染色显示（９７．６±１．２５％，逡逑实验重复３次）的细胞分化为巨噬细胞（如图２－２）。逡逑■酽逦■■逡逑图２－１：培养第１天及第３天巨噬细胞形态图２－２：巨噬细胞标志物Ｆ４／８０荧光染色逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ｏｆ邋ＢＭＤＭ邋ｏｎ逦Ｆｉｇｕｒｅ２－１：邋Ｔｈｅ邋Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ邋ｏｆ逡逑ｄａｙ邋１邋ａｎｄ邋ｄａｙ邋３逦ＢＭＤＭ邋ｓｉｇｎａｔｕｒｅ邋Ｆ４／８０逡逑２．４．２邋ＦNB；ＦＰ质粒转染情况：逡逑将ＥＧＦＰ质粒丨瞬T转染到ＢＭＤＭ中４８ｈ后于荧光显微镜ｆ观察，可见荧光逡逑表达ＢＭＤＭ占（７６．５０±２．０１％，实验重复３次）（如图２－３）。逡逑图２－３：邋ＥＧＦＰ质粒的转染逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－３：邋Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＥＧＦＰ邋ｐｌａｓｍｉｄｓ逡逑１３逡逑

形态图,巨噬细胞,形态,荧光染色

【参考文献】