星状神经节阻滞对体外循环大鼠凋亡通路相关蛋白及炎症因子表达的影响

发布时间：2020-10-24 12:55

　　 目的:通过构建SD大鼠右侧星状神经节阻滞(SGB)模型、SD大鼠心脏不停跳体外循环(CPB)模型、SD大鼠术前右侧星状神经节阻滞模型联合心脏不停跳体外循环模型(CPB+SGB),成功构建模型后,以此来检测术前进行右侧星状神经节阻滞技术,对心脏不停跳条件下的体外循环SD大鼠海马组织的各种作用效果,并进行相关炎症通路和凋亡通路的机制研究,以期能为临床上星状神经节阻滞技术应用于体外循环起到指导作用,并为该技术对体外循环下的脑组织起到的保护效果,提供较为实用且可靠的相关理论依据。方法:认真挑选SPF级成年雄性SD大鼠24只,体重测量值在350g左右,将上述24只SD大鼠进行随机分组,分为4组,包括:假手术组(S组),单纯进行右侧星状神经节阻滞模型组(SGB组),单纯进行心脏不停跳体外循环模型组(CPB组),术前成功右侧星状神经节阻滞联合心脏不停跳体外循环模型组(CPB+SGB组),四组分别有6只。浅麻醉后,CPB+SGB组和SGB组构建右侧星状神经节阻滞模型,随后加深麻醉;CPB组和S组则进行正常麻醉。在上述操作之后,以上四组都进行SD大鼠的右侧颈静脉与双下侧股动脉穿刺并置留置管,接着做以下几步:CPB组和CPB+SGB组成功进行心脏不停跳的体外循环,两个小时后停止实验;而S组和SGB组只需进行严密观测,两个小时后停止实验。实验过程中严密监测并记录大鼠的呼吸频率、四肢皮肤颜色、心率、脉搏、血压、疼痛、血氧、瞳孔和角膜反射的改变等生命体征。实验结束,快速分离大鼠大脑海马组织,取一部分海马组织用中性甲醛溶液固定后石蜡包埋切片,行HE染色后查察大鼠海马组织的病理学改变,用免疫组化法定性测验大鼠海马组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达;另外取一部分-80℃保存备用于逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Caspase-3基因的表达;再取一部分-80℃保存备用于Western blot(WB)法检测Caspase-3蛋白的表达。最后选择其中一部分用电镜观察其海马神经元超微结构的改变。结果:成功构建大鼠单纯右侧星状神经节阻滞模型、大鼠单纯心脏不停跳体外循环模型、大鼠术前右侧星状神经节阻联合心脏不停跳体外循环模型。HE结果显示:通过光学显微镜的镜头,可观测到S组和SGB组海马CA1区细胞形态正常,神经元基本结构均没有发生变化,细胞群的排列大部分较为整齐,细胞膜以及内部细胞器构造较为完整,细胞核的核仁清晰可见无变化,细胞核周围的细胞器较多且结构正常;CPB组和CPB+SGB组海马神经元细胞超微结构可见明显损伤,海马神经元细胞发生肿胀,细胞间排列紊乱,胞核与胞膜之间的界限不清,细胞核核仁溶解消失,细胞核出现核固缩,细胞核周围的细胞器明显减少,出现明显的海马神经元细胞凋亡现象;与CPB组比较,CPB+SGB组出现的各种损伤程度均相对减轻。ELISA结果显示:与S组比较,CPB组和CPB+SGB组的血浆TNF-α、IL-6浓度水平在T1、T2时点均发生了明显升高(P0.05);与CPB组比较,CPB+SGB组血浆TNF-α、IL-6浓度在T1、T2时点明显降低(P0.05)。免疫组化结果显示:与S组比较,CPB组、CPB+SGB组Bax蛋白表达量明显增加(P0.05);与CPB组比较,CPB+SGB组Bax蛋白表达量明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增加(P0.05)。PCR结果显示:与S组比较,CPB组、CPB+SGB组Caspase-3 mRNA表达量明显增加(P0.05);与CPB组比较,CPB+SGB组Caspase-3 mRNA表达量明显减少(P0.05)。WB结果显示:与S组比较,CPB组、CPB+SGB组Caspase-3蛋白表达量明显增加(P0.05);与CPB组比较,CPB+SGB组Caspase-3蛋白表达量明显减少(P0.05)。结论:体外循环可引起海马组织凋亡增多,导致大鼠脑损伤;星状神经节阻滞可降低血浆TNF-α、IL-6浓度,从而调节机体的炎症反应,并通过下调Bax、上调Bcl-2的表达水平,导致Caspase-3的蛋白表达减少,进而减少海马组织的细胞凋亡,最终对心脏不停跳条件下的体外循环大鼠的脑组织起到一定程度的保护作用。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R614
【部分图文】：

SGB后的大鼠Figure1TheratafterSGB

人工肺体外循环模型示意图

节阻滞对体外循环下大鼠凋亡通路相关蛋白及炎症因子表达的影响 2018表 2 各组大鼠不同时点血浆 TNF-α浓度（pg/ml, ±s))Table 2 Concentration of plasma TNF-α at each time in each group(pg/ml, ±组别 T0 T1 T2S 组 1.82±0.30 1.83±0.34 2.00±SGB 组 1.81±0.33 1.85±0.35 2.01±CPB 组 2.29±0.39 3.98±0.56ac4.78±PB+SGB 组 1.90±0.37 2.56±0.48abc3.36± S 组比较，aP＜0.05；与 CPB 组比较，bP＜0.05；与 T0 比较，cP＜0.05；与 5
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本文编号：2854494