脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植对退变椎间盘修复及CXCR4、NF-κB表达的影响

发布时间：2020-10-31 19:48

　　 目的:全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,构建大鼠尾椎间盘退变模型,观察脊伸痹通方联合BMSCs移植对退变椎间盘修复及CXCR4、NF-κB表达的影响。方法:从大鼠股骨骨髓中提取BMSCs,全骨髓贴壁法体外培养至P3代,通过形态学观察、细胞表面标志物检测、增殖情况观测对其鉴定,液氮中冻存以待后续移植使用。采用经皮纤维环穿刺法制造大鼠尾椎间盘退变模型,磁共振动态检测其退变情况。选取50只处于同一退变程度的造模大鼠,将其随机分成5组。具体干预方法为:A组:尾静脉BMSCs移植+高剂量“脊伸痹通方”中药汤剂灌胃;B组:尾静脉BMSCs移植+中剂量“脊伸痹通方”中药汤剂灌胃;C组:尾静脉BMSCs移植+低剂量“脊伸痹通方”中药汤剂灌胃;D组:尾静脉BMSCs移植+等体积纯水灌胃;E组:尾静脉PBS液注射+纯水灌胃。干预1月后复查磁共振,联合HE染色观察退变椎间盘修复情况。ELISA法检测血清、椎间盘中CXCR4、NF-κB的表达情况。结果:全骨髓贴壁法体外培养的大鼠P3代BMSCs,形态学观察显示其结构均一性较高,有较强的增殖能力。通过流式细胞技术,对于经典的细胞表面标志物进行鉴定,证实为骨髓间充质干细胞。经皮纤维环穿刺法制造的大鼠尾椎间盘退变多为改良Thompson分级Ⅲ级。治疗1月后,经磁共振检测及HE染色得知,脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植能够有效延缓大鼠尾椎间盘退变,且较单纯骨髓间充质干细胞移植效果更好。各组动物椎间盘、血清中均有CXCR4、NF-κB表达。同一组的血清中CXCR4、NF-κB含量显著高于椎间盘中的含量(p0.05),差异具有统计学意义;经骨髓间充质干细胞移植的A～D组各组的CXCR4、NF-κB表达显著高于空白对照的E组(p0.05),差异具有统计学意义。脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植治疗的高剂量组(A组)、中剂量组(B组)以及低剂量组(C组)均可促进CXCR4、NF-κB的表达,且呈浓度依赖性。结论:全骨髓贴壁法能够培养出纯度较高、增殖良好的P3代BMSCs。经皮纤维环穿刺法制造的大鼠尾椎间盘退变模型操作简单、损伤小、造模成功率高、可行性强。磁共振具有安全、无辐射、无骨伪影、对比度高等优点,可用于动物椎间盘退变相关性疾病的检测。结合组织学染色技术,能够更加客观的进行椎间盘退变程度评估。骨髓间充质干细胞移植能够延缓椎间盘退变,联合脊伸痹通方可提高其修复能力,脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植修复椎间盘退变的机制可能与上调CXCR4、NF-κB的表达有关。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R681.5
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 理论研究
    1. 祖国医学对椎间盘退变的认识
    2. 祖国医学对椎间盘退变的治疗
    3. 现代医学对椎间盘退变的研究
        3.1 流行病学
        3.2 病因及发病机制
        3.3 现代治疗进展
    4. CXCR4、NF-κB与椎间盘退变的关系
    5. 脊伸痹通方的组方特点及治疗经验
第2章 实验研究
    1. 大鼠骨髓间充质干细胞的制备及鉴定
        1.1 实验材料和方法
        1.2 实验步骤
        1.3 实验结果
        1.4 讨论
    2. 经皮穿刺大鼠尾椎间盘退变模型的建立
        2.1 实验材料和方法
        2.2 实验步骤
        2.3 实验结果
        2.4 讨论
    3. 脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植对退变椎间盘修复的影响
        3.1 实验材料和方法
        3.2 实验步骤
        3.3 实验结果
        3.4 讨论
    4. 脊伸痹通方联合骨髓间充质干细胞移植对椎间盘、血清CXCR4、NF-κB表达的影响
        4.1 实验材料和方法
        4.2 实验步骤
        4.3 统计学分析
        4.4 讨论
第3章 总结
参考文献
攻读硕士学位期间取得的学术成果
致谢

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本文编号：2864423