粒细胞集落刺激因子对大鼠急性脊髓损伤后Nogo—A表达的影响

发布时间：2020-11-04 14:48

　　 目的探讨粒细胞集落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)对急性脊髓损伤(Acute spinal cord injury,ASCI)大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响。方法本实验采用自制的Allen's打击器制作大鼠T9节段急性脊髓损伤模型。48只体重(190-210)g SD大鼠随机分为单纯椎板切除组(正常组)、脊髓损伤组(对照组)和脊髓损伤后G-CSF治疗组(治疗组),每组16只;治疗组在损伤后早期给予G-CSF颈部皮下注射,正常组及对照组相同时间点予以相同剂量的生理盐水注射。分别于术后第1、3、7、14天处死动物、心脏插管多聚甲醛灌注固定、取打击受损脊髓节段做成组织切片。术后每天对三组大鼠后肢运动功能行Basso Beattie Bresnahan(BBB)评分直至处死。用H-E染色法观察受损脊髓组织的形态学变化,免疫组织化学染色法观察受损脊髓组织中Nogo-A蛋白在各时间点的动态表达特征,高清晰病理图文管理系统测量脊髓组织中Nogo-A蛋白的平均光密度数值;Western-blot(蛋白印迹)法测定各组相应时间点脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达量,并与正常组相比较。结果1.BBB评分治疗组和对照组大鼠后肢在术后均呈现迟缓性瘫痪状态,前3天两组大鼠后肢仍有明显运动功能障碍;术后第7天、14天,两组大鼠后肢运动功能明显提高,且治疗组大鼠后肢BBB评分明显优于照组大鼠(p0.05)。2.HE染色镜观,治疗组和对照组大鼠脊髓组织在损伤后均有不同程度的结构紊乱,表现为神经元细胞水肿、出血、炎性细胞浸润等;随后,神经元纤维逐渐断裂、坏死,神经元细胞空泡样变性、凋亡。与对照组不同,G-CSF治疗组大鼠的神经元细胞损伤区域局灶性出血,残留神经元数量较对照组多,仍可见排列整齐的残留神经元纤维,未见大面积空泡出现,局部少量小胶质细胞增生,神经元残留结构较对照组完整。3.免疫组化染色三组大鼠的脊髓组织中均能见到Nogo-A蛋白表达。单纯椎板切除组大鼠脊髓组织中的Nogo-A蛋白仅少量存在,表达量显著低于G-CSF治疗组和对照组大鼠(p0.05)。Nogo-A蛋白表达量在损伤后第7天达峰值,之后逐渐下降,其表达强度呈现出第7天第14天第3天第1天的特点;在各相同时间点,G-CSF治疗组脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达量明显低于对照组大鼠(p0.05)。4.Western-blot结果单纯椎板切除组脊髓组织中Nogo-A蛋白表达量在损伤后各时间点相对恒定,治疗组和对照组脊髓组织中Nogo-A蛋白表达量则波动明显,在损伤后第7天达峰值,之后逐渐下降,其表达强度呈现出先扬后抑的特点。术后第1天、第3天、第7天、第14天,治疗组大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达量明显低于对照组大鼠(p0.01)。结论1.大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织中Nogo-A蛋白较正常大鼠明显升高,其表达强度呈现出第7天第14天第3天第1天的特点。2.粒细胞集落刺激因子可能抑制了急性脊髓损伤后大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白的表达。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R651.2
【部分图文】：

速拿离撞击针，致伤势能为10g×25mm，造成大鼠脊髓损伤。A：椎管打开后显露的正常脊髓 B：打击后迅速充血水肿的脊髓图2.1 造模前后脊髓外观变化AB

注：A:治疗组第1天 B：治疗组第3天 C：治疗组第7天 D：治疗组第14天E:对照组第1天 F：对照组第3天 G：对照组第7天 H：对照组第14天图3.2 治疗组和对照组大鼠脊髓组织结构（HE染色，×400）ABCE F GHD

2.1.2 正常组：大鼠脊髓结构清晰，光镜下可见白质、灰质和灰质中的前角与后角以及脊髓中央管；灰质白质分界清楚。白质无水肿，见到排列整齐的条状神经纤维，灰质中见神经元胞体、树突、大量少突胶质细胞和无髓神经纤维包绕，灰质前角中见大量成群分布的前角运动细胞，后角中见少量、散列排列的神经细胞，脊髓中央见脊髓中央管，周围组织无炎性细胞浸润，可见呈多边形的神经元胞体，核居中，无细胞水肿、出血等病理变化，结果详见(图 3.3)。
【参考文献】

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本文编号：2870232