microRNA在mitoKATP开放抗心肌缺血—再灌注损伤中差异表达的初步研究

发布时间：2020-11-08 23:19

【摘要】：目的:本文拟采用大鼠心脏缺血-再灌注模型,对mitoKATP正常、缺血、mitoKATP开放与阻断四种状态心肌细胞miRNA和基因表达模式进行分析,筛选和鉴定mitoKATP不同状态下的特征miRNA;利用生物信息学等方法分析特征mi RNA介导的调控网络及其关键节点,获得mitoKATP介导的抗MIRI与miRNA调控网络,为临床预防和治疗MIRI的研究提供新的理论依据。方法:标准健康SD大鼠,体重250-300克,予以戊巴比妥钠对大鼠行腹腔注射麻醉,麻醉完成后将大鼠用平板固定,沿着肋骨边缘迅速剪开腹壁暴露膈肌后剪下心脏,建立大鼠离体心脏Langendorff灌注模型,将48只大鼠随机分为4组:N组、I/R组、DZ组、5HD组,每组12只。N组:K-H液持续逆灌120min。I/R组:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,再复灌70min。DZ组:K-H液逆灌并平衡20min后,心肌缺血30min后,停灌末后立刻给予mitoK_(ATP)特异性开放剂二氮嗪(Diazoxide,DZ)灌注5min。5HD组:K-H液逆灌平衡20min,心肌缺血25min后,停灌末立刻给予mitoK_(ATP)特异性阻滞剂五羟基葵酸(5-Hydroxy decanoic acid,5HD)灌注5min后再继续给予二氮嗪灌注5min。上述分组除N组外,均在平衡20 min后调整冠脉流量使平均灌注压维持在60~70 mmHg之间,于平衡末停灌,32℃全心缺血30 min后,继续灌注37℃含氧K-H液70 min,使平均灌注压维持在60~70 mmHg之间。检测指标:(1)在平衡末和复灌末分别观察和记录各组心脏心功能指标;(2)在复灌末,用TTC染色检测心肌梗死面积;(3)在复灌注末将左心室心肌组织取下迅速放入液氮中冻存,各组每4个心脏混合为一个样本,即每组3个样本。TRIzol法提取心肌总RNA。将12个样本(4组×3个样本/组)mRNA和miRNA碎片化处理后,构建测序文库。Illumina测序平台测序;(4)选取差异表达的miRNA,用qRT-PCR技术验证测序结果可靠性;(5)通过Gene Ontology、KEGG Pathway等数据库分析差异基因所在的生物调控通路及网络。结果:(1)在再灌末,除HR外,LVDP、LVEDP、CF以及+dp/dtmax等指标在各组间比较均有显著差异。(2)与N组相比,I/R组的心肌梗死面积显著增多(P0.05);DZ组心肌梗死面积比I/R组显著降低(P0.05);5-HD组心肌梗死面积比DZ组显著增多(P0.05)。(3)测序结果显示,与N组比较,I/R组上调miRNA有192个,下调的miRNA为77个;与I/R组比较,DZ组上调的miRNA为118个,下调的为48个;与DZ组比较,5-HD组上调的miRNA为37个,下调的为123个。(4)选取在各组间具有显著性差异表达的且表达量高的17个miRNA,利用qRT-PCR进行验证,其中8个mi RNA的qRT-PCR结果同样在各组间具有显著性差异,分别为:rno-miR-328a-3p、rno-miR-676、rno-miR-128-3p、rno-miR-30c-5p、rno-miR-30d-5p、rno-miR-148a-3p、rno-miR-novel-chr5_59812、rno-mi R-novel-chr1-36162。(5)通过Gene Ontology、KEGGPathway等数据库分析上述8个miRNA及可能调控的mRNA的调控通路及网络。结论:(1)二氮嗪后处理对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,使用5-HD处理后会使心肌缺血再灌注损伤加重,结果显示mitoK_(ATP)通道在心肌缺血再灌注损伤中十分重要;(2)通过测序技术及qRT-PCR方法,选出9个候选mi RNA,其中miR-128、miR-328a-3p、miR30d-5p、miR-30c以及miR-676、mi R-361可能参与调控mitoKATP通道对心肌缺血再灌注损伤的作用机制。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R614
【图文】：

121.3.3 不同分组灌注方法（图 1）图1 各组离体心脏灌流示意图（1）N组： K-H液灌注平衡20min后，继续K-H液灌注100min；（2）I/R组： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，再复灌70min；（3）DZ组： K-H液灌注平衡20min后，停灌30min，于再灌注开始即刻，主动脉逆灌50μM二氮嗪 5 min，再复灌65min；（4）5-HD组：K-H液灌注平衡20min后，停灌25min

各组在平衡末及再灌末心功能的比较统计图

遵义医学院硕士学位论文 聂 佳2.2 心脏梗死面积的比较2.2.1 和正常组相比，缺血组的心肌梗死面积显著增大（P＜0.05）；保护组心肌梗死面积相比缺血组显著减小（P＜0.05）；阻断组心肌梗死面积相对保护组显著增大（P＜0.05）。（见图 3、图 4 及表 4）
【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：2875506