成肌细胞外泌体介导miRNA促成骨分化的作用及机制研究

发布时间：2020-12-25 11:11

　　肌肉和骨骼在骨质疏松、肌少症等疾病中往往同步变化,存在密切联系。相邻肌骨之间存在正反馈的回路机制,以通过分泌调控因子相互调节,并且在细胞水平存在细胞间信号传导,但均属于分泌蛋白。外泌体作为一种由细胞分泌的囊泡,可以介导多种活性分子进入受体细胞发挥调控作用。其中,外泌体对miRNA有浓缩作用,且外泌体膜结构可以保护miRNA免受RNA酶的降解,功能性miRNA具有多靶点调控效应。已有研究表明外泌体可以介导功能性miRNA进入受体细胞发挥调控作用。但目前以外泌体的角度阐述肌骨间相互作用的研究尚未见报道。目的:本研究旨在明确成肌细胞外泌体对成骨细胞成骨分化的促进作用,并对其介导miRNA促成骨分化的作用机制作进一步探索,为骨组织工程的研究和相关疾病治疗提供新的思路和理论依据。方法:（1）提取成肌细胞C2C12细胞外泌体,采用透射电镜和Western blot法从形态学和分子生物学两方面对其进行鉴定。（2）为检测C2C12细胞外泌体对MC3T3-E1细胞矿化能力的影响,示踪实验确定外泌体进入到细胞,MC3T3-E1细胞中加入提取得到的外泌体继续培养,构建成骨诱导模型,茜素红染色、ALP活性检测... 

【文章来源】：济南大学山东省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

2C12细胞外泌体的鉴定Fig.2.IdentificationofC2C12cellexosomes

图 1. C2C12 细胞外泌体的提取Fig.1. Extraction of C2C12 cell exosomes体的鉴定采用 Exoquick 试剂提取得到外泌体后，包埋切片后经透射电镜观察发在 30-100 nm 之间。Western blot 实验结果显示，提取得到的 C2C12胞组相比，均表达 CD9、CD63 和 CD81 标记蛋白。综上结果确定，肌细胞 C2C12 细胞来源的外泌体。

3. C2C12 细胞外泌体能够进入 MC3T3-E1 细胞内somes derived from C2C12 myoblasts entered MC3T种板后经矿化诱导液和加入外泌体的矿化诱盒对细胞进行染色，观察鉴定加入外泌体后。图 4 为茜素红染色结果的镜下观察图，M为加入外泌体的矿化诱导液诱导组，结果发 天后宏观条件下可以看到明显的矿化结节，的矿化结节。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Wnt2/β-catenin信号通路及其在肿瘤中的作用[J]. 李华,周德俊.  广东医学. 2015(02)
[2]miR-26a对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的调控作用[J]. 范龙坤,华泽权,金岩,时炳正.  中国医科大学学报. 2012(07)



本文编号：2937538