HMGB1/RAGE信号通路介导间充质干细胞向血管细胞分化及其在移植动脉硬化中的应用研究
发布时间:2020-12-26 21:48
背景:间充质干细胞(MSC)的移植通过促进内皮再生为移植动脉硬化的治疗带来了新的希望。然而,其功效和安全性仍在研究中,特别是,最近有研究发现新生内膜的平滑肌细胞来源于MSC样细胞。高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路参与调节MSCs的迁移和分化,因此我们推测其可被用于改善细胞治疗的结果。目的:本研究的目的就是探究这一假设。方法:用HMGB1细胞因子处理或用HMGB1慢病毒载体修饰大鼠MSCs以激活HMGB1/RAGE信号通路。RAGE通过特异性RNA载体进行靶向抑制。我们评估了体外载体转染后的细胞和移植动脉硬化大鼠模型中移植的细胞的迁移和分化能力。测定CD31和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平用以评估MSC向内皮细胞和平滑肌细胞的分化能力。结果:用外源性HMGB1细胞因子处理或HMGB1慢病毒载体转染能够促进MSC迁移并能够促进血管内皮生长因子(VEGF)诱导MSC分化为CD31阳性(CD31+)细胞,同时抑制血小板衍生生长因子(PDGF)诱导MSC分化成α-SMA阳性(α-SMA+)细胞。敲低RAGE表达水平可阻断上述效应。HMGB1修饰...
【文章来源】:南京医科大学江苏省
【文章页数】:57 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
慢病毒载体转染MSCs后,分别通过细胞免疫荧光实验及westernblot蛋白免疫荧光实验检测HMGB1及RAGE的表达
南京医科大学硕士学位论文二、HMGB1 通过活化 RAGE 促进 MSC 迁移HMGB1 / RAGE 信号通路能够促进 MSC 迁移。用重组 HMGB1 处理细胞或用pLV-HMGB1 转染细胞后,transwell 小室实验结果表明迁移的 MSC 的数目与对照组相比明显增加。然而,RAGE 敲除能够抑制 HMGB1 诱导的细胞迁移。用pshRNA-RAGE 转染的细胞对 HMGB1 处理的反应较差,并且迁移细胞的数量显着低于阴性对照组(图 2)。
17图 3:分别接受高迁移率族蛋白 1(HMGB1)刺激和晚期糖基化终产物受体(RAGE)抑制处理后 MSCs 向 CD31+细胞分化情况。通过免疫荧光染色实验(a)和流式细胞技术(b)检测 CD31 +细胞群。外源性 HMGB1 处理和 pLV-HMGB1 转染均可协调血管内皮生长因子(VEGF)诱导 MSC 向 CD31 +细胞分化。在 100ng / ml HMGB1处理时,CD31 +细胞的比例从 16%增加到 27%,并且在 pLV-HMGB1 转染后从 21%增加到 58%。 然而,刺激效应可被 RAGE 敲低抑制。 用 pshRNA-RAGE1,pshRNA-RAGE2 和 pshRNA-RAGE3 转染细胞后,CD31 +细胞的百分比分别从 22.5%降至 3.0%,6.4%和 4.0%。每组实验重复三次。数据使用曼 - 惠特尼检验进行组间比较。 ** P <0.05。DAPI 4',6-二脒基-2-苯基吲哚
本文编号:2940509
【文章来源】:南京医科大学江苏省
【文章页数】:57 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
慢病毒载体转染MSCs后,分别通过细胞免疫荧光实验及westernblot蛋白免疫荧光实验检测HMGB1及RAGE的表达
南京医科大学硕士学位论文二、HMGB1 通过活化 RAGE 促进 MSC 迁移HMGB1 / RAGE 信号通路能够促进 MSC 迁移。用重组 HMGB1 处理细胞或用pLV-HMGB1 转染细胞后,transwell 小室实验结果表明迁移的 MSC 的数目与对照组相比明显增加。然而,RAGE 敲除能够抑制 HMGB1 诱导的细胞迁移。用pshRNA-RAGE 转染的细胞对 HMGB1 处理的反应较差,并且迁移细胞的数量显着低于阴性对照组(图 2)。
17图 3:分别接受高迁移率族蛋白 1(HMGB1)刺激和晚期糖基化终产物受体(RAGE)抑制处理后 MSCs 向 CD31+细胞分化情况。通过免疫荧光染色实验(a)和流式细胞技术(b)检测 CD31 +细胞群。外源性 HMGB1 处理和 pLV-HMGB1 转染均可协调血管内皮生长因子(VEGF)诱导 MSC 向 CD31 +细胞分化。在 100ng / ml HMGB1处理时,CD31 +细胞的比例从 16%增加到 27%,并且在 pLV-HMGB1 转染后从 21%增加到 58%。 然而,刺激效应可被 RAGE 敲低抑制。 用 pshRNA-RAGE1,pshRNA-RAGE2 和 pshRNA-RAGE3 转染细胞后,CD31 +细胞的百分比分别从 22.5%降至 3.0%,6.4%和 4.0%。每组实验重复三次。数据使用曼 - 惠特尼检验进行组间比较。 ** P <0.05。DAPI 4',6-二脒基-2-苯基吲哚
本文编号:2940509
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