可溶性IL-36受体抑制IL-17和IL-36γ诱导的REG3A延缓伤口愈合

发布时间：2017-04-09 07:25

  本文关键词：可溶性IL-36受体抑制IL-17和IL-36γ诱导的REG3A延缓伤口愈合，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：角质形成细胞位于皮肤的最外层,占表皮细胞总数的90%,对皮肤发挥正常功能起到关键的作用。在与皮肤相关的疾病当中,例如银屑病和伤口中,角质形成细胞都扮演着重要的角色。已知IL-17可以促进伤口愈合,并诱导角质形成细胞表达IL-36y和REG3A(胰岛再生源蛋白3A),但其具体机制尚未研究清楚。本研究通过基因沉默技术发现IL-17通过激活IL-17RA和Actl来诱导IL-36γ的表达；而敲低角质形成细胞中IL-36y的表达,使得IL-17诱导的REG3A表达也降低,表明IL-17诱导REG3A的表达部分依赖于IL-36γ；进一步研究发现IL-36y通过与其受体IL-36R结合,进而激活下游p38-Akt-β-catenin信号通路,来诱导REG3A的表达,最终促进角质形成细胞的增殖。在小鼠体内,我们发现：IL-17基因敲除小鼠的伤口愈合速度明显比野生型小鼠慢,皮肤伤口中IL-36γ和RegⅢγ的表达量也比野生型小鼠低。进一步研究发现：当向IL-17基因敲除的小鼠皮间注射IL-36γ时,IL-36γ可以促进皮肤伤口处RegⅢγ的表达,从而加快皮肤伤口的愈合。另外,我们发现了一种可溶性的IL-36受体,我们称之为sIL-36R。在角质形成细胞中超表达sIL-36R,它可以抑制IL-17和IL-36γ诱导的REG3A,从而抑制由IL-17和IL-36γ促进的细胞伤口愈合。根据IL-1家族中其他可溶性受体的功能,我们推测sIL-36R可能是通过与膜上受体竞争性结合IL-36γ,从而抑制其下游信号通路,来抑制伤口愈合。综上所述,本课题阐明了IL-17在角质形成细胞中通过诱导IL-36y来诱导REG3A表达,从而促进小鼠皮肤伤口愈合的分子机制,同时我们发现SIL-36R可以抑制IL-36γ的功能。因此,本研究为治疗皮肤伤口提供新的理论基础。
【关键词】：角质形成细胞 白介素36 白介素17 可溶性白介素36受体 伤口愈合
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R641
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 第一章 综述11-27
• 一、角质形成细胞的功能11-15
• 1、角质形成细胞在伤口愈合中的功能11-13
• 2、角质形成细胞在皮肤过度炎症性疾病中的功能13-15
• 3、角质形成细胞与其他皮肤疾病15
• 二、IL-1家族可溶性受体的发现及功能15-23
• 1、IL-1亚家族可溶性受体的发现及功能17-21
• 2、IL-18亚家族可溶性受体的发现及功能21-22
• 3、IL-1家族可溶性受体对角质形成细胞功能的影响22-23
• 三、IL-36亚家族及其对角质形成细胞功能的影响23-26
• 1、IL-36亚家族成员23
• 2、IL-36受体23-24
• 3、IL-36家族对角质形成细胞功能的影响24-26
• 四、总结与展望26-27
• 第二章 可溶性IL-36受体抑制IL-17和IL-36γ诱导的REG3A延缓皮肤伤口愈合的分子机制27-72
• 一、引言27-29
• 二、实验材料29-41
• 2.1 实验仪器和耗材29
• 2.2 主要试剂的配制29-36
• 2.3 反应体系36-37
• 2.5 抗体37-38
• 2.6 实验动物38
• 2.7 细胞株38
• 2.8 菌株38
• 2.9 引物38-39
• 2.10 shRNA序列39-41
• 2.11 质粒41
• 三、实验方法41-52
• 3.1 细菌感受态的制备41-42
• 3.2 重组质粒的构建42-43
• 3.3 连接产物的转化43-44
• 3.4 阳性克隆的筛选44
• 3.5 细胞培养44-45
• 3.6 细胞蛋白的提取45
• 3.7 细胞RNA的抽提45
• 3.8 小鼠基因型的鉴定45-46
• 3.9 小鼠伤口模型的构建46
• 3.10 组织蛋白的提取46-47
• 3.11 组织RNA的提取47
• 3.12 荧光定量PCR47
• 3.13 慢病毒质粒的构建与包被47-48
• 3.14 细胞的转染和感染48-49
• 3.15 蛋白质免疫印迹49-50
• 3.16 细胞划痕伤口愈合实验50
• 3.17 重组蛋白的表达纯化50-51
• 3.18 实验数据的统计与分析51-52
• 四、实验结果与分析52-69
• 4.1 IL-17在角质形成细胞中诱导IL-36γ表达的分子机制52-54
• 4.2 IL-36γ在角质形成细胞中诱导REG3A表达的分子机制54-58
• 4.3 IL-36γ介导IL-17诱导REG3A58
• 4.4 IL-17和IL-36γ对角质形成细胞增殖的调节作用58-61
• 4.5 IL-17和IL-36γ在小鼠伤口中的作用61-63
• 4.6 sIL-36R在IL-17、IL-36γ诱导的REG3A中所起到的作用63-66
• 4.7 sIL-36R抑制IL-17、IL-36γ促进的伤口愈合66-69
• 五、讨论69-72
• 第三章 总结72-74
• 参考文献74-80
• 附录Ⅰ 缩略词表80-82
• 硕士期间参与申请的专利82-83
• 致谢83-84

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本文编号：294768