脂肪干细胞对华勒氏变性早期雪旺细胞增殖与去分化影响的初步研究
发布时间：2021-01-07 10:38
目的通过构建大鼠华勒氏变性体外模型,研究在周围神经系统华勒氏变性早期,SD大鼠脂肪干细胞对雪旺细胞增殖与去分化的影响。方法在无菌条件下从SD大鼠腹股沟取出皮下脂肪组织,采用I型胶原酶消化法分离提取大鼠脂肪干细胞并进行体外培养和传代,倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况。通过流式细胞学鉴定其脂肪干细胞相关表面标记物。获取大鼠双侧坐骨神经制备大鼠华勒变性体外模型,并进行分组,实验组即是将大鼠华勒变性体外模型与脂肪干细胞进行非接触式共培养,对照组为单独体外培养的大鼠华勒变性体外模型。Real time PCR检测不同时间点（0h,24h,72h）实验组与对照组p75NTR和MPZ m RNA表达量。Western blot检测体外培养72h后实验组与对照组p75NTR和MPZ蛋白表达量。培养不同时间点（24h,48h,72h）后免疫组化染色法检测两组雪旺细胞增殖标记物Ki67的表达情况,Tunel法检测两组雪旺细胞的凋亡情况。结果成功分离培养SD大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪检测脂肪干细胞高度表达CD90,CD105,不表达CD34。Real time PCR结果显示体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去...
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置显微镜下SD大鼠原代脂肪干细胞(ADSCs)形态（×40）
图 2 SD 大鼠脂肪干细胞(ADSCs)表面抗原标记物检测Fig2 Detection of surface antigen marker on ADSCs3.3Real time PCR 检测脂肪干细胞（ADSCs）干预后体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去分化标记物 p75NTR 和分化标记物 MPZ 的 mRNA 表达情况将单独培养的大鼠体外华勒氏变性模型中的坐骨神经组织设为对照组，同时将与第 2 代脂肪干细胞（ADSCs）通过 Transwell 小室进行非接触式共培养的坐骨神经组织设为实验组，收集不同时间点（0 小时，24 小时，72 小时）的大鼠坐骨神经组织，用 Real time PCR 检测不同时间点实验组与对照组 p75NTR 和 MPZmRNA 表达量相对值（以 β-actin 为内参基因）。采用两样本 t 检验对不同时间点（24 小时，72 小时）实验组与对照组 p75NTR 和 MPZ mRNA 表达量的差异进行统计分析。结果如图 3 所示，随着时间推移，体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去分化标记物 p75NTR mRNA 表达量逐渐增高，实验组 p75NTR mRNA 表达量增高较
安徽医科大学硕士学位论文模型中雪旺细胞分化标记物 MPZ mRNA 表达量则逐渐降低，且实验组降低趋势较对照组更加明显，培养 72 小时后，实验组 MPZ mRNA 表达量较对照组显著降低（72h co-culture vs 72h control ，t=10.16，p<0.001）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cytokines in adipose-derived mesenchymal stem cells promote the healing of liver disease[J]. Saifun Nahar,Yoshiki Nakashima,Chika Miyagi-Shiohira,Takao Kinjo,Zensei Toyoda,Naoya Kobayashi,Issei Saitoh,Masami Watanabe,Hirofumi Noguchi,Jiro Fujita. World Journal of Stem Cells. 2018(11)
[2]脂肪源性干细胞促进大鼠神经施万细胞增殖和分泌功能[J]. 宋起滨,王哲,王宇令,李杨,林爽. 中国医科大学学报. 2018(06)
博士论文
[1]IL-1β对外周神经系统华勒变性中施旺细胞的影响[D]. 陈刚.南方医科大学 2015
[2]TNF-α对施万细胞去分化和干细胞标志物表达的影响[D]. 高雅姗.上海交通大学 2015
本文编号：2962412
【文章来源】：安徽医科大学安徽省
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
倒置显微镜下SD大鼠原代脂肪干细胞(ADSCs)形态（×40）
图 2 SD 大鼠脂肪干细胞(ADSCs)表面抗原标记物检测Fig2 Detection of surface antigen marker on ADSCs3.3Real time PCR 检测脂肪干细胞（ADSCs）干预后体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去分化标记物 p75NTR 和分化标记物 MPZ 的 mRNA 表达情况将单独培养的大鼠体外华勒氏变性模型中的坐骨神经组织设为对照组，同时将与第 2 代脂肪干细胞（ADSCs）通过 Transwell 小室进行非接触式共培养的坐骨神经组织设为实验组，收集不同时间点（0 小时，24 小时，72 小时）的大鼠坐骨神经组织，用 Real time PCR 检测不同时间点实验组与对照组 p75NTR 和 MPZmRNA 表达量相对值（以 β-actin 为内参基因）。采用两样本 t 检验对不同时间点（24 小时，72 小时）实验组与对照组 p75NTR 和 MPZ mRNA 表达量的差异进行统计分析。结果如图 3 所示，随着时间推移，体外华勒氏变性模型中雪旺细胞去分化标记物 p75NTR mRNA 表达量逐渐增高，实验组 p75NTR mRNA 表达量增高较
安徽医科大学硕士学位论文模型中雪旺细胞分化标记物 MPZ mRNA 表达量则逐渐降低，且实验组降低趋势较对照组更加明显，培养 72 小时后，实验组 MPZ mRNA 表达量较对照组显著降低（72h co-culture vs 72h control ，t=10.16，p<0.001）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Cytokines in adipose-derived mesenchymal stem cells promote the healing of liver disease[J]. Saifun Nahar,Yoshiki Nakashima,Chika Miyagi-Shiohira,Takao Kinjo,Zensei Toyoda,Naoya Kobayashi,Issei Saitoh,Masami Watanabe,Hirofumi Noguchi,Jiro Fujita. World Journal of Stem Cells. 2018(11)
[2]脂肪源性干细胞促进大鼠神经施万细胞增殖和分泌功能[J]. 宋起滨,王哲,王宇令,李杨,林爽. 中国医科大学学报. 2018(06)
博士论文
[1]IL-1β对外周神经系统华勒变性中施旺细胞的影响[D]. 陈刚.南方医科大学 2015
[2]TNF-α对施万细胞去分化和干细胞标志物表达的影响[D]. 高雅姗.上海交通大学 2015
本文编号：2962412
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/waikelunwen/2962412.html
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