渗透压和Ca 2+ 调控椎间盘髓核细胞中CCN2/CTGF的表达和机制研究

发布时间：2021-01-07 11:46

　　一、研究背景下腰痛是我国临床脊柱外科门诊中最常见的病人就诊原因之一,也是全世界发病率最高的骨骼肌肉系统疾病。在过去的25年里,下腰痛的患病率和致残率显著增加,总发病率在35-55岁的年龄范围内达到顶峰,并可能随着人口老龄化而进一步增加。疾病发生时,患者活动能力受到限制,严重者无法实现正常的生理功能和日常生活,影响生活质量,甚至导致残疾。流行病学研究表明,在导致下腰痛的诸多因素里,椎间盘退变是最主要的原因之一。现有的治疗方案其目的多是对症治疗,以缓解症状,却无法从根本上扭转椎间盘退变的趋势。因此,深入研究椎间盘组织的生理机制和退变的病理过程,从中探索发现潜在的生物治疗靶点,实现椎间盘组织结构和生物力学功能的重塑,可能成为椎间盘退变治疗新的突破点。椎间盘组织的微环境与体内其他组织存在显著差异,其特点是低p H值、低葡萄糖浓度、低氧浓度和高渗透压,其中高渗透压是健康椎间盘组织微环境中最为独特和重要的理化环境之一。研究发现,在椎间盘老化和退变过程中,髓核组织细胞外基质合成减少、降解加快,导致椎间盘内的渗透压下降明显,并因此引起一系列病理生理反应,加速椎间盘组织内炎症的发生和退变的进展。Ca

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

腰椎椎间盘退变Pfirrmann分级示意图

- 35 -（四）大鼠髓核细胞和纤维环细胞中 CCN2 的表达水平分析我们进一步分析了CCN2在大鼠髓核和纤维环细胞中的表达情况。图1.4 A显示CCN2在大鼠的髓核和纤维环细胞中均有表达，在髓核细胞中表达更高; 图1.4 B为灰度值检测，分析Western blot结果，显示CCN2在髓核细胞中的表达量约为纤维环细胞中的1.5倍（P=0.0005）；接下来，我们采用免疫荧光技术进一步验证CCN2的表达（图1.4 C），发现CCN2表达集中于围绕细胞核周围的细胞质中。根据本实验结果，结合CCN2启动子序列分析（CCN2启动子序列高度保守，详见第二部分）和现有的文献报道

海军军医大学博士学位论文- 56 -图2.1 高渗透压抑制髓核细胞中CCN2的表达A 渗透压浓度梯度干预髓核细胞24h后，Real-time PCR检测CCN2的信使RNA表达变化; B 渗透压时间梯度干预髓核细胞后，Real-time PCR检测CCN2的信使RNA表达变化; C-D 渗透压浓度梯度干预髓核细胞24h后，Western blot法检测CCN2蛋白表达变化并进行灰度值分析；E 免疫荧光检测渗透压梯度干预髓核细胞后CCN2蛋白表达变化。实验独立重复三次，所有数据都以均数±标准差( ±SD)的方式呈现，*P<0.05，Bar=50μm。

【参考文献】：
期刊论文
[1]人退变椎间盘髓核细胞体外平面培养的形态学及活性观察[J]. 王锋,郑陈静美,吴小涛.  中国矫形外科杂志. 2013(13)
[2]基质金属蛋白酶与椎间盘退变研究的新进展[J]. 綦惠,赵丹慧,田伟.  中国脊柱脊髓杂志. 2010(01)
[3]椎间盘退变机制研究进展[J]. 陈国仙,叶道明,王万明.  脊柱外科杂志. 2006(03)
[4]Structure and function of aggrecan[J]. CHRIS KIANI, LIWEN CHEN, YAO JIONG WU, ALBERT J YEE, BURTON B YANG, Sunnybrook and Women’s College Health Sciences Centre and Department of Laboratory Medicine and Patobiology, 2 Department of Surgeny, Faculty of Medicine, University of Toronto, Canada.  Cell Research. 2002(01)



本文编号：2962504