SHH缓释的聚多巴胺的纤维蛋白支架促大鼠脊髓损伤修复的实验研究
发布时间：2021-01-17 03:09
目的:近来多数研究将组织工程材料与干细胞或因子复合来改善动物脊髓损伤模型损伤处的微环境,以增加作用时长、提高恢复效果与预后。本研究旨在探究:1.制作音猬因子（SHH）-聚多巴胺（Polydopamine）-纤维蛋白（Fribin）支架并探究其缓释效果与特性。2.构建SD大鼠脊髓损伤模型,移植PD-SHH-Fibrin支架,观察相关脊髓生长蛋白阳性率,评价其修复效果。方法:1.采用真空冷冻干燥机制作Fibrin支架,制作完成后置入配好的PH=8.5的盐酸多巴胺溶液中浸泡24h进行交联,再将交联后的支架置入SHH溶液中吸附交联24h,制作完成后使用ELISA试剂盒测其缓释性能。2.取60只8周龄雌性SD大鼠,建立脊髓损伤模型,随机分4组处理:A组不植入任何材料,B组损伤处植入Fibrin支架,C组损伤处植入PD-Fibrin支架,D组损伤处植入PD-SHH-Fibrin支架,术后12周内进行下肢运动功能BBB评分;术后12周取脊髓损伤处组织,分别进行组织学观察（苏木精-伊红与免疫组织化学）与Weston blot检测。3.取40只8周龄雌性SD大鼠,建立脊髓损伤模型,随机分4组处理:A组不...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
冻干后的纤维蛋白支架大小如图A、B，扫描电镜下Fibrin支架如图C，PD-SHH-Fibrin如图D，支架可见较多音猬因子颗粒黏附
江苏大学硕士学位论文9图1.2：支架缓释持续16d，在最初5d里缓慢释放，在6-12d缓释速度加快，最终在13-16d完全释放，并在最后一天支架崩解加速释放。Figure1.2Thesustainedreleaseofthescaffoldlastedfor16days,anditwasslowlyreleasedinthefirst5days,andthesustainedreleaseratewasacceleratedin6-12days,andfinallyreleasedin13-16days,andacceleratedreleaseonthelastday.4讨论与Fibrin支架相比较，PD-SHH-Fibrin支架具有更好的缓释性能与机械强度。Fibrin支架在体内的降解时间大约7d，SHH缓释时间较短[50-51]，且未使用冻干机处理过的Fibrin支架呈果冻样，水分含量较高，注入大鼠脊髓断端凝固后本身不利于脊髓再生轴突的通过，且由于其机械强度较低，在进行大鼠肌肉缝合时很容易受压而破碎，破碎的胶体对脊髓可能造成二次损伤和压迫，不利于脊髓的修复。使用冻干机处理后的Fibrin支架不仅保留了其原有的三维孔道[27]，并且控制其大小与脊髓粗细相一致。已有研究通过在聚苯乙烯微球表面进行多巴胺涂层修饰获得了载药微囊，后续通过在聚苯乙烯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物材料表面使用多巴胺涂层固定神经生长因子，从而提高神经干细胞的增殖、分化[52-53]。因此将冻干后的纤维蛋白支架给予多巴胺涂层修饰，多巴胺本身的胶水作用提高了支架吸附因子的能力，增加了对因子的黏附性，从而增加了载药量，且多巴胺在纤维蛋白表面发生二次反应形成聚多巴胺，进一步增加了支架的机械强度。多巴胺涂层后的支架与机体有良好的相容性，其无毒性已得到广泛认可，具有良好的生物性能[25]。在术后辅助大鼠排尿时发现，用多巴胺涂层后支架的两组自主恢复排尿时间较另外两组提前，侧面印证了多巴胺调节膀胱反射，恢复大鼠排尿反射[20]，其作用机制与信号通路值
SHH缓释的聚多巴胺纤维蛋白支架促大鼠脊髓损伤修复的实验研究14图2.1SD大鼠SCI建模过程。A~D:大鼠常规备皮消毒，做背部正中切口，逐层分离皮肤，筋膜，肌肉后暴露T9-T12棘突及椎板，咬骨钳咬去椎板和棘突，除去硬脊膜，用刀片横断T10-T11节段脊髓。E:脊髓横断切口内移植支架（Fibrin，PD-Fibrin，PD-SHH-Fibrin）F~H:手术结束，逐层缝合肌肉、筋膜、皮肤，观察手术切口处无明显出血，再次碘伏棉球消毒。I:术后大鼠分笼喂养。J:二次手术时再次切开皮肤，见大量新生纤维结缔及肉芽组织，粘连严重，缓慢暴露出断端。在横断远端约10mm处缓慢注入荧光金。K：大鼠麻醉后定位大腿胫前肌，行电生理检查。L:术后继续分笼喂养。Figure2.1TheSDratSCImodelingprocess.A~D:Ratsareroutinelypreparedforskindisinfection,doamid-backincision,andseparatetheskin,fascia,andmusclestoexposetheT9-T12spinousprocessesandlaminaafterthemuscles.Bonebiteforcepsremovethelaminaandspinousprocess,removetheduramater,anduseabladetotraversetheT10-T11segmentofthespinalcord.E:Transplantationscaffold(Fibrin,PD-Fibrin,PD-SHH-Fibrin)inspinalcordtransverseincisionF~H:Attheendoftheoperation,themuscle,fascia,andskinweresuturedlayerbylayer,andtherewasnoobviousbleedingatthesurgicalincision.,andthentheiodophorcottonballwasdisinfectedagain.I:Aftersurgery,theratswerefedinseparatecages.J:Afterthesecondoperation,theskinwascutagain,andalargeamountofnewfiberconnectiveandgranulationtissuewereseen.SlowlyinjectFGapproximately10mmawayfromspinalcordinjury.K:Theanteriorthighmusclesofthethighwerelocatedafteranesthesia,andelectrophysio
本文编号：2982078
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
冻干后的纤维蛋白支架大小如图A、B，扫描电镜下Fibrin支架如图C，PD-SHH-Fibrin如图D，支架可见较多音猬因子颗粒黏附
江苏大学硕士学位论文9图1.2：支架缓释持续16d，在最初5d里缓慢释放，在6-12d缓释速度加快，最终在13-16d完全释放，并在最后一天支架崩解加速释放。Figure1.2Thesustainedreleaseofthescaffoldlastedfor16days,anditwasslowlyreleasedinthefirst5days,andthesustainedreleaseratewasacceleratedin6-12days,andfinallyreleasedin13-16days,andacceleratedreleaseonthelastday.4讨论与Fibrin支架相比较，PD-SHH-Fibrin支架具有更好的缓释性能与机械强度。Fibrin支架在体内的降解时间大约7d，SHH缓释时间较短[50-51]，且未使用冻干机处理过的Fibrin支架呈果冻样，水分含量较高，注入大鼠脊髓断端凝固后本身不利于脊髓再生轴突的通过，且由于其机械强度较低，在进行大鼠肌肉缝合时很容易受压而破碎，破碎的胶体对脊髓可能造成二次损伤和压迫，不利于脊髓的修复。使用冻干机处理后的Fibrin支架不仅保留了其原有的三维孔道[27]，并且控制其大小与脊髓粗细相一致。已有研究通过在聚苯乙烯微球表面进行多巴胺涂层修饰获得了载药微囊，后续通过在聚苯乙烯、聚乳酸-羟基乙酸共聚物材料表面使用多巴胺涂层固定神经生长因子，从而提高神经干细胞的增殖、分化[52-53]。因此将冻干后的纤维蛋白支架给予多巴胺涂层修饰，多巴胺本身的胶水作用提高了支架吸附因子的能力，增加了对因子的黏附性，从而增加了载药量，且多巴胺在纤维蛋白表面发生二次反应形成聚多巴胺，进一步增加了支架的机械强度。多巴胺涂层后的支架与机体有良好的相容性，其无毒性已得到广泛认可，具有良好的生物性能[25]。在术后辅助大鼠排尿时发现，用多巴胺涂层后支架的两组自主恢复排尿时间较另外两组提前，侧面印证了多巴胺调节膀胱反射，恢复大鼠排尿反射[20]，其作用机制与信号通路值
SHH缓释的聚多巴胺纤维蛋白支架促大鼠脊髓损伤修复的实验研究14图2.1SD大鼠SCI建模过程。A~D:大鼠常规备皮消毒，做背部正中切口，逐层分离皮肤，筋膜，肌肉后暴露T9-T12棘突及椎板，咬骨钳咬去椎板和棘突，除去硬脊膜，用刀片横断T10-T11节段脊髓。E:脊髓横断切口内移植支架（Fibrin，PD-Fibrin，PD-SHH-Fibrin）F~H:手术结束，逐层缝合肌肉、筋膜、皮肤，观察手术切口处无明显出血，再次碘伏棉球消毒。I:术后大鼠分笼喂养。J:二次手术时再次切开皮肤，见大量新生纤维结缔及肉芽组织，粘连严重，缓慢暴露出断端。在横断远端约10mm处缓慢注入荧光金。K：大鼠麻醉后定位大腿胫前肌，行电生理检查。L:术后继续分笼喂养。Figure2.1TheSDratSCImodelingprocess.A~D:Ratsareroutinelypreparedforskindisinfection,doamid-backincision,andseparatetheskin,fascia,andmusclestoexposetheT9-T12spinousprocessesandlaminaafterthemuscles.Bonebiteforcepsremovethelaminaandspinousprocess,removetheduramater,anduseabladetotraversetheT10-T11segmentofthespinalcord.E:Transplantationscaffold(Fibrin,PD-Fibrin,PD-SHH-Fibrin)inspinalcordtransverseincisionF~H:Attheendoftheoperation,themuscle,fascia,andskinweresuturedlayerbylayer,andtherewasnoobviousbleedingatthesurgicalincision.,andthentheiodophorcottonballwasdisinfectedagain.I:Aftersurgery,theratswerefedinseparatecages.J:Afterthesecondoperation,theskinwascutagain,andalargeamountofnewfiberconnectiveandgranulationtissuewereseen.SlowlyinjectFGapproximately10mmawayfromspinalcordinjury.K:Theanteriorthighmusclesofthethighwerelocatedafteranesthesia,andelectrophysio
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