低氧在TGF-β1调控软骨细胞肥大化中的作用机制

发布时间：2021-01-22 01:12

　　目的:研究低氧对TGF-β1诱导软骨细胞肥大化的影响,明确可维持软骨细胞表型的最佳氧气浓度,为构建具有正常功能的组织工程化软骨细胞的培养体系提供依据。方法:分离提取骨性关节炎、股骨颈骨折和股骨头坏死患者的关节软骨细胞,RT-q PCR检测不同疾病患者来源软骨细胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表达情况,通过免疫荧光染色检测软骨细胞内COLⅠ、COLⅡ和COLⅩ蛋白水平。利用甲苯胺蓝染色鉴定培养后的P0代软骨细胞表型。利用RT-q PCR比较P0-P3代软骨细胞COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表达水平。利用不同TGF-β1浓度（5ng/m L、15ng/m L）和氧气浓度（2%、20%）处理软骨细胞,检测COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH和PTHr P基因的m RNA表达情况及软骨细胞线粒体复合酶Ⅰ的活性。结果:与股骨颈骨折软骨细胞相比,骨性关节炎、股骨头坏死软骨细胞COL1A1表达水平分别提高（12.78±2.24）倍和（7.58±2... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

软骨细胞镜下观(100×，标尺：100μm)

（图 4.2）股骨颈骨折软骨细胞、OA 软骨细胞、股骨头坏死软骨细胞 COL1A1、COL2A1、COL10A1、MMP-13、IHH、PTHrP 表达量（*P<0.05、** P<0.01）4.3 未经培养的软骨细胞免疫荧光染色为了比较股骨颈骨折软骨细胞和 OA 软骨细胞内 COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平的差异，而采取了免疫荧光染色。发现股骨颈骨折软骨细胞的 COLⅡ荧光信号强于 OA 软骨细胞，而 OA 软骨细胞的 COLⅠ、COLⅩ荧光信号强于股骨颈骨折软骨细胞。这表明股骨颈骨折软骨细胞内 COLⅡ含量高，而 COLⅠ、COLⅩ含量较低，具有正常软骨细胞的表型；也从侧面反映 OA 软骨细胞失去了正常软骨细胞的表型，结果如图 4.3 所示。综上分析，我们将以股骨颈骨折软骨细胞作为培养、研究的对象。

17图4.3 COLⅠ、COLⅡ、COLⅩ蛋白水平通过免疫荧光来表征。COLⅠ的免疫荧光染色为红色，COLⅡ的免疫荧光染色为绿色，COLⅩ的免疫荧光染色为橘黄色。细胞核用DAPI染色显示为蓝色（放大倍数400×，标尺：20μm）4.4 培养后的软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定取已经培养好的P0代股骨颈骨折软骨细胞进行甲苯胺蓝染色鉴定。正常软


本文编号：2992247