LRTM1基因参与调控成肌分化过程的机制研究

发布时间：2021-02-15 14:56

　　实验目的骨骼肌损伤后修复是运动医学研究的热点问题,骨骼肌具有很强的再生能力以应对轻微损伤,但严重损伤可导致广泛且不可逆的纤维化,瘢痕形成和肌肉功能丧失。如何提高骨骼肌损伤后的再生修复能力,促使病人尽早康复仍是研究的难点。因此,研究骨骼肌再生修复机制,可以为骨骼肌损伤修复提供理论基础,有助于临床骨骼肌损伤的治疗。本课题主要利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除LRTM1（Leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1）基因的C2C12细胞系,研究Lrtm1对C2C12细胞成肌分化的作用及作用机制。研究方法利用CRISPR/Cas9系统将C2C12细胞中LRTM1基因稳定敲除,挑选敲除LRTM1的单克隆细胞,构建稳定敲除LRTM1的C2C12细胞株;诱导敲除LRTM1稳定细胞株成肌分化,Western blot和RT-PCR检测成肌分化标志因子Myosin和MyoG的表达;CCK8实验检测细胞敲除LRTM1后细胞的增殖情况;Western blot检测敲除LRTM1后C2C12细胞中p-ERK水平,以及ERK下游CyclinD1/CDK... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

成肌分化96小时细胞融合Fig.1Myoblastfusionafterdifferentiation96hours

化过程中的作用。我们首先构建了 C2C12 细与 6 孔板，当细胞密度达到 80%时更换分融合（图 1）。并且 Western blot 检测成表达（图 2），可以见随分化时间延长，成肌分化体系建立成功。图 1 成肌分化 96 小时细胞融合Fig.1 Myoblast fusion after differentiation 96 h

图 3 商品化抗体 LRTM1 的可疑条带位置Fig.3 Suspected band position of LRTM1 commercial anTM1 siRNA 效果验证加入 siRNA 后LRTM1 条带不变的原因是否为 LR在 C2C12 细胞中瞬时过表达 LRTM1，并转入 siR性 LRTM1 的表达，从而确定 LRTM1-siRNA 的效NA 干扰组外源性 LRTM1 成功表达，但转入 si-L有表达，并且同时转入的 GFP 能够表达，证明转染TM1 能成功抑制 LRTM1 的表达，所以商品化抗带，商品化不能特异性识别 LRTM1。

【参考文献】：
期刊论文
[1]Lrtm1基因在成肌分化过程中的功能探索[J]. 熊雷,李浩可,聂茂,邓忠良.  重庆医科大学学报. 2018(10)



本文编号：3035046